摘要
[目的]从细胞水平探究甲醇对花鲈(Lateolabrax maculatus)不同细胞系的影响,为揭示微塑料(甲醇为溶剂)对鱼类细胞的毒理作用打下基础.[方法]在体外分别以1％、3％、5％、7％、9％和11％的甲醇处理花鲈动脉球和脑细胞系细胞,倒置显微镜观察细胞形态变化,MTT检测细胞活力,通过实时荧光定量PCR检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9(Caspase9)、Bcl2关联X蛋白(Bax)和B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)等细胞凋亡相关基因,并采用Caspase3活性检测试剂盒检测Caspase3活性.[结果]当甲醇体积分数超过7％后,花鲈动脉球细胞系细胞变圆缩小,失去贴壁能力,且出现死亡细胞;细胞活力呈显著降低趋势(P<0.05,下同),Caspase3、Caspase9、Bax和Bcl-2基因相对表达量均显著上调,Caspase3活性极显著升高(P<0.01,下同).当甲醇体积分数超过1％后,花鲈脑细胞系细胞间出现空隙且细胞有回缩趋势,贴壁细胞数量明显减少,存在大量悬浮的死亡细胞;细胞活力显著降低,细胞凋亡相关基因的相对表达量均呈显著上调趋势,且随甲醇体积分数的增加其相对表达量呈上升趋势;甲醇对花鲈脑细胞系细胞Caspase3活性的影响呈浓度依赖性,即细胞Caspase3活性随甲醇体积分数的增加而升高,经5％～11％甲醇处理后极显著升高.[结论]甲醇可显著上调花鲈动脉球和脑细胞系细胞中的Caspase3、Caspase9、Bax和Bcl-2基因表达水平,并提高Caspase3活性.甲醇对不同种类细胞的毒性不同,尤其对脑细胞的毒性更强.因此,在选择甲醇为微塑料溶剂时应根据不同种类细胞配制不同的安全浓度.
基金项目
国家重点研发计划(2022YFD2400503)
广东省重点领域研发计划(2021B0202020002)
广东省乡村振兴战略项目(2022-spy-00-009)
中国水产科学研究院基本科研业务费专项(2020TD21)
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