摘要
[目的]确定引起广西人工养殖牛蛙(Rana catesbeiana)发病死亡的病原菌,了解其致病性、组织病理学特征、耐药性及耐药基因的携带情况,为该病的临床诊断及合理预防提供科学依据.[方法]采用常规细菌分离纯化方法从患病牛蛙的病灶组织中分离优势菌株,通过观察分离菌株的形态特征、生理生化特征和16S rRNA基因序列分析等对病原菌进行鉴定,以纸片扩散法测定其耐药性,通过PCR扩增分析其耐药基因和毒力基因携带情况,通过人工回归感染试验确定病原菌的致病性,并通过组织病理学探究牛蛙感染菌株后的组织特性.[结果]从患病牛蛙腿部分离得到1株优势菌株(编号NFAH-5),综合其形态学、生理生化特性、溶血特性及分子鉴定结果,确定为嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila).菌株NFAH-5对多西环素、多粘菌素B和庆大霉素等6种抗生素敏感,对头孢拉定、恩诺沙星和阿莫西林等12种抗生素已产生耐药性;经耐药基因PCR检测,发现该分离菌携带Ant(3″)-I、Intl1和parC等9种耐药基因,与耐药表型基本一致.毒力基因PCR检测结果显示,菌株NFAH-5携带Ser、aer、Lip、exu、LuxS、act和aha等7种毒力基因.人工回归感染试验结果表明,菌株NFAH-5感染牛蛙的半数致死剂量(LD50)为1.55×106 CFU/mL,感染后发病牛蛙表现四肢底侧充血发红,肝肿大呈红褐色或黄色,肠内空虚或有出血,肾充血发红,与自然发病牛蛙的症状相似.患病牛蛙的肝细胞发生变性,脾脏红、白髓质间很难辨出,可见大量血源性色素沉着物,肾小球萎缩,肾小管发生玻璃样变.[结论]嗜水气单胞菌是引起广西南宁人工养殖牛蛙发生红腿病的致病菌,结合农业农村部《水产养殖用药明白纸2022年2号》文件中批准使用的药物目录,建议选用敏感药物多西环素进行防治.
基金项目
国家自然科学基金(U20A20102)
广西自然科学基金(2022AC20012)
国家现代农业产业技术体系广西创新团队项目(nycytxgxcxtd-2021-08-02)
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