摘要
[目的]利用转录组测序技术分析枸杞多糖(LBP)对免疫抑制雏鸡脾脏基因表达的影响,挖掘LBP修复雏鸡免疫抑制的靶基因,为探究枸杞多糖对雏鸡免疫抑制的修复机制提供理论依据.[方法]将120羽7日龄海兰褐蛋鸡随机分成空白组(NC)、环磷酰胺(CTX)组(CY)和LBP组(CYLbGp),NC组肌注生理盐水,其余2组连续3d肌注80 mg/(kg·d)CTX造模,造模后通过测定血清中IL-2、IL-6和INF-γ含量对免疫抑制雏鸡模型进行验证.造模成功后在CYLbGp组饮水中加入5 mg/(kg·d)LBP,给药结束后采集脾脏进行转录组测序,以P<0.05和|log2 Fold change|≥1为条件筛选出差异表达基因(DEGs),并进行GO功能注释分析和KEGG信号通路富集分析,以探究枸杞多糖对免疫抑制的修复作用.[结果]共获得1049301886个Raw reads,对其进行质控、过滤后,共获得1032097278个Clean reads.CY组和NC组之间共有701个DEGs,CYLbGp组和CY组之间共有748个DEGs.GO功能注释显示,LBP干预后显著回调的DEGs主要与结合、细胞过程、生物调节及细胞组分等功能相关.KEGG信号通路富集结果显示,LBP干预后显著回调的DEGs主要与神经活性配体-受体相互作用和视黄醇代谢通路相关,筛选出所富集的通路中关键的DEGs为人毒蕈碱型胆碱受体M5基因(CHRM5)、烟碱型乙酰胆碱受体β4基因(CHRNB4)、代谢型型谷氨酸受体1基因(GRM1)、胆囊收缩素基因(CCK)、神经肽Y1受体基因(NPY1R)、细胞色素P450家族成员2C18基因(CYP2C18)、血管紧张素Ⅱ受体1基因(AGTR1)、细胞色素P450家族成员3A5基因(CYP3A5)、丝氨酸蛋白酶2(PRSS2)和神经紧张素基因(NTS).RT-qPCR结果与转录组学数据变化趋势基本一致,表明转录组数据有较高的可靠性.[结论]LBP修复雏鸡免疫抑制的作用机制可能与调节神经活性配体-受体相互作用和视黄醇代谢通路有关,其中CHRM5、CHRNB4、GRM1、CCK、NPY1R、CYP2C18、AGTR1、CYP3A5、PRSS2和NTS可作为LBP修复雏鸡免疫抑制的靶基因.
基金项目
宁夏回族自治区自然科学基金重点项目(2020AAC02032)
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