南方农业学报2023，Vol.54Issue(4) ：1018-1028.DOI:10.3969/j.issn.2095-1191.2023.04.006

盐胁迫下小偃麦酵母双杂交文库构建及TtLEA2-1互作蛋白筛选

Construction of yeast two-hybrid library and screening of proteins interacting with TtLEA2-1 under salt stress in Tritipyrum

张菊 杨志芬 穆远杭 石鹿溪 张庆勤 张素勤
南方农业学报2023，Vol.54Issue(4) ：1018-1028.DOI:10.3969/j.issn.2095-1191.2023.04.006
✕
  • 国家科技期刊平台
  • NETL
  • NSTL
  • 维普
  • 万方数据

盐胁迫下小偃麦酵母双杂交文库构建及TtLEA2-1互作蛋白筛选

Construction of yeast two-hybrid library and screening of proteins interacting with TtLEA2-1 under salt stress in Tritipyrum

张菊 1杨志芬 2穆远杭 1石鹿溪 1张庆勤 1张素勤3
扫码查看

作者信息

  • 1. 贵州大学农学院,贵州贵阳 550025
  • 2. 贵州大学农学院,贵州贵阳 550025;贵阳市乡村振兴服务中心,贵州贵阳 550081
  • 3. 贵州大学农学院,贵州贵阳 550025;国家小麦改良中心贵州分中心,贵州贵阳 550025
  • 折叠

摘要

[目的]构建小偃麦酵母双杂交(Y2H)文库,筛选胚胎发育晚期丰富蛋白(TtLEA2-1)的互作蛋白,为探究该基因的功能和表达调控机理提供理论参考.[方法]以小偃麦Y1805为材料,经提取RNA、分离mRNA、cDNA合成和均一化(DSN)处理后进行BP(attB和attP位点)重组反应,把重组产物转化大肠杆菌DH10B感受态细胞,构建cDNA初级文库.抽提初级文库质粒,以pGADT7-DEST载体进行LR(attL或attR位点)重组反应,再转化大肠杆菌DH10B感受态细胞,构建Y2H文库.[结果]对初级文库和Y2H文库进行质量分析,其滴度分别是3.98×106 CFU/mL和6.14×106 CFU/mL,库容量分别为7.96×106 CFU和1.23×107 CFU,重组率均为100%.从Y2H文库中挑取的24个单克隆的插入片段长度为850～4000 bp,平均片段长度大于1000 bp.采用Y2H技术和回转验证试验,从小偃麦Y2H文库中筛选了48个可能与TtLEA2-1互作的蛋白.48个TtLEA2-1互作蛋白中,有7个互作蛋白富集在遗传信息处理通路,4个蛋白富集在蛋白质家族:遗传信息过程通路,4个蛋白富集在核苷酸代谢通路,3个蛋白富集在甘氨酸生物合成和代谢通路,2个蛋白富集在碳水化合物代谢通路;富集在蛋白质家族:代谢、细胞过程、环境信息处理、氨基酸代谢通路的蛋白各有1个.[结论]构建的Y2H文库质量高、完整性好和覆盖面广,成功用于小偃麦盐胁迫响应基因互作蛋白的筛选试验,也为新基因发掘及其表达调控机理研究提供高效、便捷途径.

关键词

小偃麦/酵母双杂交(Y2H)/TtLEA2-1/互作蛋白/盐胁迫

Key words

Tritipyrum/yeast two-hybrid(Y2H)/TtLEA2-1/interacting proteins/salt stress

引用本文复制引用

基金项目

国家自然科学基金(32160442)

出版年

2023
南方农业学报
广西壮族自治区农业科学院

南方农业学报

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：0.83
ISSN：2095-1191
参考文献量23
段落导航相关论文