摘要
[目的]克隆斑地锦黄酮醇合成酶基因(EmFLS)及其启动子序列,并检测EmFLS基因在斑地锦不同生长期不同组织中的表达模式,为后续研究该基因对黄酮醇化合物生物合成的调控机制提供理论参考.[方法]以斑地锦为材料,采用cDNA末端快速扩增(RACE)技术和热不对称交互式PCR(Tail-PCR)技术克隆EmFLS基因及启动子序列,对其进行生物信息学分析,并通过实时荧光定量PCR检测其在不同生长期不同组织中的表达模式.[结果]扩增获得EmFLS基因开放阅读框(ORF)(GenBank登录号ON821211.1),长度为1002 bp,编码333个氨基酸残基,蛋白相对分子质量为37.62 kD,定位于细胞质,为不稳定的亲水性蛋白,属于2OG-Fe(Ⅱ)加氧酶超家族.EmFLS蛋白与其他13种植物FLS蛋白的氨基酸序列相似性为63.55%～70.51%,其中与木薯FLS蛋白的氨基酸序列相似性最高,且在系统发育进化树上处于一个独立的分支.EmFLS基因启动子约1800 bp,除含有真核生物启动子核心元件TATA-box和CAAT-box外,还含激素响应、胁迫响应和光响应等顺式作用元件.EmFLS基因在营养生长期和生殖生长期的根、茎、叶和果中均有表达,但在根和茎中的相对表达量显著高于叶和果(P<0.05,下同),斑地锦从营养生长期到生殖生长期EmFLS基因在根和茎中的相对表达量显著下降,而在叶中无显著变化(P>0.05).[结论]EmFLS基因表达具有组织特异性,且在根和茎中具有发育阶段特异性,推测EmFLS基因主要参与调控斑地锦根和茎中黄酮醇化合物的生物合成.
基金项目
江西省社会科学"十四五"基金(23TQ05)
江西省教育厅科学技术研究项目(GJJ2205907)
江西省中医药管理局科技计划(2023B1309)
江西省抚州市科技计划重点研发项目(23TQ05)
Scientific and Technological Research Project of Jiangxi Education Department(GJJ2205907)
Science and Technology Plan Project of Jiangxi Provincial Administration of Traditional Chinese Medicine(2023B1309)
Key Research and Development Project of Science and Technology in Fuzhou,Jiangxi(2020ED66)
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