摘要
[目的]明确非脂化脂肪酸(NEFA)胁迫对牛骨骼肌细胞线粒体功能及脂肪酸代谢过程的影响,为揭示围产期奶牛营养代谢病的作用机理提供参考依据.[方法]建立NEFA胁迫牛骨骼肌细胞模型,经最佳浓度—时间组合刺激后,采用透射电镜观察牛骨骼肌细胞线粒体的形态变化,通过油红O染色及BODIPY 493/503染色观察细胞内脂质沉积情况,采用流式细胞术检测线粒体膜电位,利用试剂盒检测细胞内的过氧化氢酶(CAT)和超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量,并以实时荧光定量PCR检测线粒体功能及脂质代谢相关基因表达情况.[结果]综合NEFA对牛骨骼肌细胞存活率及其形态的影响,选取1.5 mmol/L NEFA刺激2h作为后续试验的最佳浓度—时间组合.经1.5 mmol/L NEFA刺激2h后,牛骨骼肌细胞线粒体体积变小、基质颜色加深,线粒体嵴排列紊乱,且趋向于融合现象,甚至部分呈空泡状;线粒体膜电位下降的细胞数量明显增多,较对照组(刺激0h)显著提高38.08%(P<0.05,下同);细胞培养上清液MDA含量较对照组(刺激0h)显著提高1.38倍,而细胞内的CAT活性极显著降低60.63%(P<0.01,下同),SOD活性显著降低34.21%.实时荧光定量PCR检测结果显示,经1.5 mmol/L NEFA刺激2h后,调控线粒体基因复制与转录的NRF1和PGC-1α基因、调控线粒体融合的MFN2基因、线粒体呼吸链关键酶基因(除COV基因外)、含Patatin样磷脂酶域2蛋白基因(PNPLA2)及长链脂酸延伸酶6基因(ELOVL6)的相对表达量均极显著降低,而肉毒碱脂酰转移酶1B基因(CPT1B)的相对表达量极显著提高.[结论]高浓度的NEFA对牛骨骼肌细胞具有脂毒性,对线粒体形态、功能与膜电位均产生影响,能引发线粒体功能障碍及导致细胞脂肪酸代谢异常,产生氧化应激,进而诱导脂质异常沉积.
基金项目
国家自然科学基金(32002205)
贵州省科学技术基金重点项目(黔科合基础[2020]1Z028)
动物营养学国家重点实验室面上项目(2004DA125184F1902)
国家科技期刊平台
NSTL
维普
万方数据