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基于5-甲基胞嘧啶抗体的DNA甲基化电化学检测

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目的:构建一种基于5-甲基胞嘧啶(5-mC)抗体的电化学生物传感器,用于DNA多甲基化位点的定量分析.方法:采用纳米金修饰金电极(AuNPs/Au),以自组装方式依次将单链DNA(ssDNA)、巯基己醇(MCH)和靶DNA连接到AuNPs/Au上制备DNA电化学传感器,经过电化学表征检测电极修饰效果;再以5-mC抗体特异性识别靶DNA中的甲基化位点,并以辣根过氧化物酶标记二抗(HRP-IgG)为信号示踪物,优化杂交时间及抗5-mC抗体浓度;采用差分脉冲伏安法(DPV)分别检测非甲基化与不同数量甲基化DNA的电化学信号,同时考察该方法的重复性与稳定性.结果:电化学表征结果表明电极修饰成功,优化实验条件结果显示最优杂交时间为90 min、最佳抗体浓度为10 mg/L,在该条件下DNA电化学传感器能有效区分甲基化与非甲基化DNA,并且DPV峰电流的大小与DNA甲基化位点的数量呈线性关系,具有较好的重复性与稳定性.结论:制备的DNA电化学传感器能对多个位点的DNA甲基化定量检测,有望成为临床DNA甲基化位点定量检测的有效手段.
Electrochemical Detection of DNA Methylation Based on 5-Methylcytosine Antibody

粟莎莎、张姝、黄健、陈曦、李艳、方立超、邓钧、莫非、郑峻松

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贵州医科大学医学检验学院,贵州贵阳550004

贵州医科大学附院临床检验中心,贵州贵阳550004

陆军军医大学药学与检验医学系,重庆400038

DNA甲基化 电化学传感器 5-甲基胞嘧啶 抗体 定量分析

国家自然科学基金

81572078

2019

贵州医科大学学报
贵阳医学院

贵州医科大学学报

CSTPCD
影响因子：0.827
ISSN：2096-8388
年,卷(期)：2019.44(11)
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