家蝇三龄幼虫Clip-Msp基因克隆及白假丝酵母菌刺激下的时空表达

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中文摘要：目的:克隆家蝇的Clip-丝氨酸蛋白酶基因(Clip-Msp),并对Clip-Msp在白假丝酵母菌感染后的时空表达模式进行研究.方法:通过基因工程的方法,构建pMD19-T/Clip-Msp克隆载体;采用生物信息学方法,分析Clip-Msp基因的开放阅读框和氨基酸序列及Clip-Msp蛋白的功能结构域;以GAPDH作为内参照,于家蝇三龄幼虫感染白假丝酵母菌后3、12、24及48 h时,采用实时荧光定量PCR方法检测Clip-Msp在不同组织(体壁、脂肪体、血淋巴、唾液腺、肠道、马氏管和气管)中的表达情况.结果:成功构建pMD19-T/Clip-Msp克隆载体,生物信息学分析显示,Clip-Msp基因开放阅读框全长1524 bp,共编码507个氨基酸、无信号肽、存在跨膜区,属于非经典分泌型蛋白;Clip-Msp蛋白的N端存在一个Clip结构域,C端有一个Tryp_SPc催化结构域,属于单催化结构域Clip-丝氨酸蛋白酶超家族;白假丝酵母菌感染家蝇三龄幼虫后,Clip-Msp基因在不同时间点、不同组织中表达存在差异(P<0.05),3 h时以血淋巴中表达量增加最高,12 h时以脂肪体、气管、唾液腺及肠道中表达量增加为主、脂肪体内的相对表达量最高,24 h时肠道组织表达增加最明显、脂肪体次之,48 h时血淋巴中表达量高于马氏管及肠道.结论:成功克隆Clip-Msp基因,Clip-Msp基因主要分布在血淋巴、脂肪体和肠道组织.

外文标题：Cloning Clip-Msp Gene from Housefly Third Instar Larva Musca domestica and Analyzing its Temporal-Spatial Expression Pattern Stimulated by Candida albicans

作者：

常振策、李忠旬、修江帆、卢成、贾利娜、国果、吴建伟

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作者单位：

贵州医科大学贵州省普通高等学校现代病原生物学特色重点实验室,贵州贵阳 550025

贵州医科大学寄生虫学教研室,贵州贵阳 550025

关键词：

家蝇 Clip-Msp基因白假丝酵母菌基因表达感染生物信息学

基金：

国家自然科学基金国家科技支撑计划贵州省农业攻关贵州省科学技术基金

项目编号：

813602542011BAC06B12[黔科合NY20143054][黔科合J字20122038]

出版年：

2020

贵州医科大学学报

贵阳医学院

贵州医科大学学报

CSTPCD

影响因子：0.827

ISSN：2096-8388

年,卷(期)：2020.45(2)

参考文献量15