采用改进的CTAB法提取长柄双花木(Disanthus cercidifolius var.longipes)基因组DNA,并以此DNA为模板,对ISSR-PCR的反应体系进行了优化,建立了适合长柄双花木ISSR-PCR的反应体系和程序,即20μL的反应体系中,含模板DNA 20 ng,Mg2+2.0 mmol·L-1,引物0.25 μmol·L-1.dNTPs 0.20 mmol·L-1,Taq DNA聚合酶1.0 U;扩增程序:94℃预变性5 min,94℃变性30 s,48～54 ℃复性45 s;72℃延伸90 s;共36个循环;循环结束后,72℃延伸7 min.本研究为利用这一分子标记对长柄双花木进行遗传多样性分析奠定了基础.
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