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中药艾总 DNA 的提取及 ISSR-PCR 反应体系的优化

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为探索艾的遗传多样性,采用正交试验方法 L16(45)与单因素分析法相结合对其 PCR 反应的5个主要因素(Mg2+、引物、模板 DNA、dNTPs 以及 Taq 酶)在4个水平上分别进行优化。结果表明:得到最佳的反应体系(20μL)为模板 DNA 60 ng,Mg2+2.5 mmol/L,引物0.8μmol/L,dNTPs 0.15 mmol/L,Taq酶1.0 U。通过统计数据分析,对艾 ISSR-PCR 反应的影响程度依次为 Mg2+浓度>引物>模板 DNA>dNTPs 浓度>Taq 酶。
Total DNA Extraction from Artemisia argyi and Optimization on ISSR-PCR Reaction System
In order to explore the genetic diversity of A.argyi,an orthogonal experimental design was employed combined with single factor analysis to optimize the five main factors(Mg2+ ,primers,template DNA,dNTPs and Taq DNA enzyme)of PCR reaction in four levels.Results:The optimal ISSR-PCR reaction system:20 μL system,template DNA 60 ng,Mg2+ 2.5 mmol/L,primer 0.8 μmol/L,dNTPs 0.15 mmol/L,Taq DNA enzyme 1.0 U.The results of range analysis showed that the order of the influence degree to ISSR was Mg2+ > primer> template DNA> dNTPs > Taq DNA enzyme.

Artemisia argyimolecular markerISSRtraditional Chinese medicine

王惠君、王文泉、卢诚、王海燕、陈新

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琼州学院,海南 三亚 572022

中国热带农业科学院 热带生物技术研究所,海南 海口 571101

分子标记 ISSR 传统中药

国家自然科学基金国家自然科学基金国家自然科学基金中央级科研院所基本科研业务费项目

312611403633100053731171230ITBBZX0843

2015

贵州农业科学
贵州省农业科学院

贵州农业科学

CSTPCD
影响因子:0.642
ISSN:1001-3601
年,卷(期):2015.(6)
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