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橘荔散结丸醇提物化学成分的UHPLC-QE-MS分析及其抗子宫肌瘤细胞的药效机制研究

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[目的]运用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱串联质谱(UHPLC-QE-MS)技术分析橘荔散结丸醇提物的化学成分,并探讨其对子宫肌瘤细胞增殖的抑制作用及机制.[方法](1)以UHPLC-QE-MS技术分析橘荔散结丸醇提物化学成分.(2)培养原代人子宫肌瘤细胞.采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)测定不同浓度橘荔散结丸醇提物处理不同时间后的细胞增殖抑制率,并筛选后续实验中其2个高、低浓度.实验分为空白对照组,二甲基亚砜(DMSO)组,米非司酮组及橘荔散结丸醇提物高、低浓度组,分别给予相应处理后,采用流式细胞术检测细胞周期,Western Blot或定量聚合酶链反应(qPCR)法分别检测细胞Wnt/糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路关键蛋白Wnt 5b、GSK-3β、p-GSK-3β、β-catenin、表皮生长因子受体(EGFR)和基质金属蛋白酶2(MMP2)的蛋白、mRNA表达水平.[结果]鉴别橘荔散结丸醇提物主要化学成分91个,橘荔散结丸醇提物冻干粉与中成药橘荔散结片主要化学成分共有22个.橘荔散结丸醇提物各浓度组细胞增殖抑制率均大于空白对照组(P<0.05);橘荔散结丸醇提物高、低浓度组及米非司酮组G0/G1期细胞数均大于空白对照组,而G2/M期细胞数小于空白对照组(P<0.05);橘荔散结丸醇提物高、低浓度组及米非司酮组Wnt 5b、β-catenin、EGFR、MMP2蛋白、mRNA表达水平均低于与空白对照组(均P<0.05),而GSK-3β蛋白及mRNA表达水平与空白对照组无显著性差异(P>0.05).[结论]UHPLC-QE-MS技术分离橘荔散结丸醇提物化学成分众多,主要成分具有氧化应激调节作用;橘荔散结丸醇提物可有效抑制子宫肌瘤细胞增殖,其分子机制与抑制Wnt/GSK-3β/β-catenin信号通路关键蛋白表达,进而干预子宫肌瘤细胞微环境氧化应激反应有关.
UHPLC-QE-MS Analysis of the Chemical Constituents of the Alcoholic Extract of Juli Sanjie Pills and Its Pharmacodynamic Mechanism Against Uterine Fibroid Cells

Juli Sanjie Pillsuterine fibroidsalcoholic extractsultra-high performance liquid chromatography-Q exactive-mass spectrometry(UHPLC-QE-MS)Wnt/glycogen synthase kinase 3β(GSK-3β)/β-catenin signalling pathwayoxidative stresscell culture

谢卓庭、王乃平、程晓榆、李坤寅

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广州中医药大学东莞医院,广东东莞 523000

广州中医药大学第三附属医院,广东广州 510375

橘荔散结丸 子宫肌瘤 醇提物 超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱串联质谱(UHPLC-QE-MS) Wnt/糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)/β-连环蛋白(β-catenin)信号通路 氧化应激 细胞培养

广东省自然科学基金广东省中医药局项目广东省普通高等学校重点领域专项东莞市高水平专项

2020A1515010600202030032021ZDZX201520231800903501

2024

10.13359/j.cnki.gzxbtcm.2024.02.030

广州中医药大学学报
广州中医药大学

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CSTPCD
影响因子：1.055
ISSN：1007-3213
年,卷(期)：2024.41(2)
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