摘要
利用IPTG诱导含暗紫贝母(Fritillaria unibracteata)苯丙氨酸解氨酶FuPAL-pET28a的重组大肠杆菌BL21菌株,经Ni2+亲和层析与质谱鉴定获得纯度较高的FuPAL重组蛋白.以海藻酸钙凝胶为固定化介质,包埋FuPAL重组蛋白.单因素考察试验与统计学分析结果表明,海藻酸钠质量分数、CaCl2浓度、固定化时间、海藻酸钠与酶质量比影响固定化酶的活性,它们的最优条件分别为3.5%、1 g/L、4 h与40 000∶1.进一步采用L9(34)正交试验设计,确定影响因素的重要性从高到低依次为CaCl2浓度、海藻酸9钠质量分数、固定化时间、海藻酸钠与酶质量比,最佳的固定化条件是CaCl2浓度为2 g/L,海藻酸钠质量分数为4%,固定化时间为3h,海藻酸钠与酶质量比为40 000∶1.在该优化工艺条件下,制备的固定化酶凝胶颗粒呈较好的圆整性和均一性,相对酶活力达到最高,为68.53%.该固定化方法具有试验成本低、工艺流程简单、反应条件温和的特点,应用前景较好,并为固定化FuPAL蛋白的制备优化提供了重要的理论基础.
基金项目
成都市科技局项目(2022-YF05-01357-SN)
中央高校医工结合项目(2682022ZTPY053)
四川省中医药管理局项目(2021MS116)
国家级大学生创新创业训练计划资助项目(202310613068)
西南交通大学个性化实验项目(GX202316017)
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