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羊种布氏杆菌M5-90Δ26基因缺失疫苗双重实时荧光定量PCR方法的建立

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为了寻找一种能够鉴别布氏杆菌M5-90Δ26疫苗株与其他布氏杆菌菌株的双重实时荧光定量PCR检测方法.针对布氏杆菌菌株的16SrRNA和Bp26基因,各设计一套引物和探针,并优化反应体系和反应程序.以布氏杆菌A19、S2、M5-90和M5-90Δ26四种疫苗株以及大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、李斯特菌、沙门氏菌、链球菌进行双重荧光定量PCR扩增,评价该方法的特异性.克隆构建PCR_16S rRNA_Bp26标准品,通过倍比稀释进行双重荧光定量PCR扩增,评价该方法的灵敏度.使用该方法与虎红平板凝集试验、试管凝集试验进行检测结果对比,评价该方法的可行性.结果显示,本方法特异性好,布氏杆菌A19、S2、M5-90三种疫苗株均同时出现Bp26基因和16S rRNA基因的扩增,布氏杆菌M5-90Δ26疫苗株只出现16S rRNA基因的扩增,大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、李斯特菌、沙门氏菌、链球菌均未出现扩增曲线.该方法建立的16S rRNA基因序列扩增通道和Bp26基因序列扩增通道对标准品的最低检测限均达5 copies/μL.该方法对临床样本的检测结果与虎红平板凝集试验、试管凝集试验检测结果符合率较高,说明建立的羊种布氏杆菌M5-90Δ26基因缺失疫苗双重实时荧光定量PCR检测方法可用于临床的检测,为鉴别布氏杆菌M5-90Δ26疫苗株免疫与布氏杆菌野毒株感染提供一种可行的检测方法.

刘尚博、王振华、郑可、秦建华

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布氏杆菌 M5-90Δ26疫苗株 双重实时荧光定量PCR 鉴别诊断

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2024

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河北省畜牧兽医学会 北方牧业杂志社

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年,卷(期)：2024.40(8)
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