为了优化湖羊精液超低温冷冻保存技术,改善超低温冷冻后的湖羊精液品质,试验采用假阴道法采集6只纯种湖羊精液作为供试精液,用A、B、C 3种不同成分的基础稀释液(基础稀释液A中含0.3 g/L葡萄糖、0.3 g/L柠檬酸钠、20％卵黄、1％100x青霉素和链霉素混合液;基础稀释液B中含18.252 g/L柠檬酸、5.044 g/L葡萄糖、36.342 g/L Tris、20％卵黄、1％100x青霉素和链霉素混合液;基础稀释液C中含有13.75 g/L柠檬酸、9.6 g/L果糖、27 g/L Tris、20％卵黄、1％100x青霉素和链霉素混合液)稀释后冷冻,解冻后测定精子活率、顶体完整率和质膜完整率,筛选最优基础稀释液;然后在最优基础稀释液中添加0,0.05,0.10,0.20 mg/mL的具有抗氧化功能的植物提取物冷冻保护剂(黄芪提取物、针叶樱桃提取物和竹叶提取物按质量比2 ∶ 1 ∶ 1混合而成)进行精液冷冻,解冻后测定精子活率、顶体完整率、质膜完整率及抗氧化指标[活性氧(ROS)和丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性],筛选最优植物提取物添加量;最后选择96只发情母羊,分为鲜精组、植物提取物组、未添加植物提取物组,每组32只,鲜精组用新鲜精液输精,植物提取物组用筛选的最优植物提取物添加量下的冻精输精,未添加保护剂组用未添加植物提取物的最优基础稀释液下的冻精输精,统计每组母羊受胎率.结果表明:基础稀释液C的精子活率、顶体完整率均显著高于A、B基础稀释液(P＜0.05),质膜完整率介于基础稀释液A和B之间,但与基础稀释液A和B均差异不显著(P＞0.05).相较于0,0.05,0.20 mg/mL添加量,0.10 mg/mL植物提取物冷冻保护剂提高了精子活率、顶体完整率、质膜完整率以及SOD和GSH-Px(除低于0.20 mg/mL添加量外)活性,降低了 ROS和MDA含量.植物提取物组的母羊受胎率(51.9％)显著高于未添加植物提取物组(43.3％).说明选用基础冷冻稀释液C,同时加入0.10 mg/mL植物提取物冷冻保护剂可以改善湖羊冷冻后精液品质,提高输精后母羊的受胎率,可以达到生产实践要求的标准.
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