PRRSV类NADC30毒株免提取核酸荧光定量RT-PCR检测方法的建立

Establishment of a nucleic acid extraction-free fluorescence RT-PCR detection method for PRRSV NADC30-like strain

于新友 ¹李天芝 ¹肖跃强 ²沈志强²

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作者信息

1. 山东绿都生物科技有限公司,山东滨州256600
2. 山东省滨州畜牧兽医研究院,山东滨州256600
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摘要

为了建立简便、快速检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)类NADC30毒株免提取核酸荧光定量RT-PCR方法,试验根据GenBank中PRRSV类NADC30毒株NSP2基因设计引物和探针,建立了直接对样品中PRRSV类NADC30毒株检测的荧光定量RT-PCR方法.对该方法的敏感性、特异性和重复性进行评估,并对临床样本进行检测.结果表明:建立的PRRSV类NADC30毒株免提取核酸荧光定量 RT-PCR 方法的扩增体系(20 μL)为 2×PrimeDirect Probe RT-qPCR Mix 10 μL,PRRSV类 NADC30 毒株液 1 μL,NADC30-F(15 μmol/μL)0.8 μL,NADC30-R(15 μmol/μL)0.8 μL,NADC30-P(15 μmol/μL)0.4 μL,灭菌纯化水7 μL.扩增程序为 90℃3 min;60℃5 min;95℃5 s,54℃20 s(收集荧光信号,选择FAM通道),40个循环.该法特异性好,对其他猪常见病原无交叉反应.对PRRSV类NADC30毒株液的最低检测限度为3.98 TCID50/100μL,与传统提取核酸的荧光定量RT-PCR检测方法敏感性一致.不同病毒含量样本组内和组间变异系数均不高于2％,具有良好的重复性和稳定性.临床样本检测结果与传统荧光定量RT-PCR方法检测结果一致.说明建立的PRRSV类NADC30毒株免提取核酸荧光定量RT-PCR检测方法特异性好、敏感性高,具有良好的重复性和稳定性,可用于PRRSV类NADC30毒株的临床检测.

关键词

猪繁殖与呼吸综合征病毒/类NADC30毒株/免提取核酸/荧光定量RT-PCR/敏感性

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基金项目

山东省自然科学基金(ZR2014CM047)

山东省重大科技创新工程项目(2019JZZY010720)

出版年

2022

黑龙江畜牧兽医(下半月)

ISSN：

参考文献量18

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