摘要
为了从猪血清中分离纯化IgG并制备其Fab片段,试验分别利用Protein G亲和层析法和辛酸-硫酸铵沉淀法(CA-AS法)纯化猪血清中IgG,再通过木瓜蛋白酶水解猪IgG得到Fab片段,并通过Protein A层析柱分离猪Fab和Fc片段,进一步利用凝胶层析纯化猪Fab.通过SEC-HPLC鉴定获得的猪Fab片段的纯度,并通过ELISA和Western-blot鉴定其活性.结果表明:成功从猪血清中纯化得到猪IgG,Protein G亲和层析法较CA-AS法获得的猪IgG纯度更高,纯度＞95％,可用于后续猪Fab片段制备试验.木瓜蛋白酶与抗体质量比为1∶10时,水解15 h将猪IgG完全水解.进一步利用Protein A和凝胶层析法纯化猪Fab片段,SEC-HPLC鉴定获得猪Fab片段纯度＞99％,ELISA和Western-blot鉴定其活性良好.说明试验成功从猪血清中分离猪IgG,并制备其Fab片段.
基金项目
重庆市农高专项(cstc2020ngzx0001)
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