摘要
为了获得具有抗病毒活性的水牛γ干扰素(interferon-γ,IFN-γ)蛋白,试验采用PCR方法扩增水牛IFN-γ基因编码区序列,将其与pET-32a载体连接,构建重组表达质粒pET32a-IFN-γ,并将其转化至大肠杆菌BL21感受态细胞中,用IPTG诱导表达目的蛋白,对表达的重组蛋白进行SDS-PAGE分析、纯化、Western-blot鉴定与质谱分析,以及抗病毒活性检测.结果表明:水牛IFN-γ基因编码区序列PCR扩增产物大小约为520 bp;重组表达质粒pET32a-IFN-γ的双酶切和测序鉴定结果均正确;阳性菌株经诱导后表达的重组蛋白大小约为39 ku,主要以可溶性蛋白形式表达,且能与His标记小鼠源单克隆抗体发生特异性反应,其肽段氨基酸序列与目的蛋白氨基酸序列完全匹配;纯化后的重组蛋白IFN-γ能够有效抑制牛病毒性腹泻病毒引起的细胞病变,抗病毒活性约为294.1 U/mg.说明水牛IFN-γ蛋白在大肠杆菌中成功表达,并具有一定抗病毒活性.
基金项目
广西壮族自治区科技重大专项(桂科AA17204057)
广西八桂学者专项(2019A50)
国家万人计划领军人才专项(W02060083)
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