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水牛γ干扰素的原核表达及其抗病毒活性

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为了获得具有抗病毒活性的水牛γ干扰素(interferon-γ,IFN-γ)蛋白,试验采用PCR方法扩增水牛IFN-γ基因编码区序列,将其与pET-32a载体连接,构建重组表达质粒pET32a-IFN-γ,并将其转化至大肠杆菌BL21感受态细胞中,用IPTG诱导表达目的蛋白,对表达的重组蛋白进行SDS-PAGE分析、纯化、Western-blot鉴定与质谱分析,以及抗病毒活性检测.结果表明:水牛IFN-γ基因编码区序列PCR扩增产物大小约为520 bp;重组表达质粒pET32a-IFN-γ的双酶切和测序鉴定结果均正确;阳性菌株经诱导后表达的重组蛋白大小约为39 ku,主要以可溶性蛋白形式表达,且能与His标记小鼠源单克隆抗体发生特异性反应,其肽段氨基酸序列与目的蛋白氨基酸序列完全匹配;纯化后的重组蛋白IFN-γ能够有效抑制牛病毒性腹泻病毒引起的细胞病变,抗病毒活性约为294.1 U/mg.说明水牛IFN-γ蛋白在大肠杆菌中成功表达,并具有一定抗病毒活性.
Prokaryotic expression and antiviviral activity of recombinant interforon-γ in buffaloes

李小凤、谢芝勋、武晓倩、范晴、谢志勤、韦悠、谢丽基、万丽军、王盛、张艳芳、黄娇玲、罗思思

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广西壮族自治区兽医研究所,南宁530001

水牛 γ干扰素 原核表达 抗病毒活性 质谱分析

广西壮族自治区科技重大专项广西八桂学者专项国家万人计划领军人才专项

桂科AA172040572019A50W02060083

2022

10.13881/j.cnki.hljxmsy.2021.05.0198

黑龙江畜牧兽医(下半月)

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ISSN：
年,卷(期)：2022.(7)
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