黑龙江畜牧兽医(下半月)2022，Issue(8) ：66-70,75,135.DOI:10.13881/j.cnki.hljxmsy.2021.05.0034

H9N2亚型禽流感病毒血凝素蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

Preparation and identification of monoclonal antibodies against hemagglutinin protein of H9N2 avian Influenza A virus

侯力嘉 吴胜昔 龚吕鸿 刘姿怡 杨溪 郭宇 梁望旺
黑龙江畜牧兽医(下半月)2022，Issue(8) ：66-70,75,135.DOI:10.13881/j.cnki.hljxmsy.2021.05.0034
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H9N2亚型禽流感病毒血凝素蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

Preparation and identification of monoclonal antibodies against hemagglutinin protein of H9N2 avian Influenza A virus

侯力嘉 1吴胜昔 2龚吕鸿 2刘姿怡 2杨溪 2郭宇 2梁望旺3
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作者信息

  • 1. 重庆理工大学药学与生物工程学院,重庆400054;陆军军医大学第二附属医院检验医学中心输血科,重庆400037
  • 2. 重庆理工大学药学与生物工程学院,重庆400054
  • 3. 重庆市动物疫病预防控制中心,重庆401120
  • 折叠

摘要

为了制备H9N2亚型禽流感病毒(AIV)的单克隆抗体,从而为建立AIV的诊断方法提供有效试剂,试验将纯化后的H9N2亚型AIV血凝素(HA)蛋白作为免疫原注射至Balb/c小鼠腹腔中,取符合融合标准的小鼠脾脏制成悬液,同小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0)进行融合,制备杂交瘤细胞;建立单克隆细胞株的筛选方法以得到能够稳定分泌抗体的单克隆细胞株,并对其分泌的单克隆抗体进行纯化,测定效价及浓度,并分别检测其与H9N2标准病毒的反应性及特异性.结果表明:经过筛选后共获得3株可持续分泌抗H9N2 AIV HA的单克隆细胞株,分别以2D10D10、1F10E7和5A10C3命名.其中1F10E7细胞株抗体效价可达到1:128 000,浓度最高可达到2.431 9 mg/mL;经亚型鉴定,以上3株杂交瘤细胞均为IgGl型.通过特异性试验检测,制备所得HA单克隆抗体只与纯化后的AIV HA抗原结合且与H9N2标准病毒能够发生反应.说明试验制备了针对AIV HA蛋白的单克隆抗体,可为后续禽流感检测方法的研究提供有效试剂.

关键词

禽流感病毒/单克隆抗体/血凝素蛋白/特异性/检测试剂/细胞融合

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基金项目

重庆市技术创新与应用示范项目(cstc2019jscx-msxmX0370)

重庆市技术创新与应用示范项目(cstc2018jscxmszdX0049)

重庆市巴南区科技计划(2020TJZ008)

重庆理工大学研究生创新基金(lgycx20202128)

大学生创新创业训练计划(2020CX059)

大学生创新创业训练计划(2020CX064)

重庆市生猪产业技术体系建设项目(20211105)

出版年

2022
黑龙江畜牧兽医(下半月)

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ISSN：
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