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绵羊精子RNA提取方案的优化

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为了减少绵羊精液中其他体细胞污染和裂解不充分等因素而导致精子RNA回收率低、质量差的问题,试验以新鲜的美利奴羊精液为研究对象,采用Percoll+hSOF和Percoll+PBS密度梯度离心法和PBS直接洗涤法纯化绵羊精液,然后再采用TRIzol(65℃)法和TRIzol(65℃)+试剂盒法提取绵羊精子RNA,检测RNA的浓度、纯度和完整性,将RNA反转录为cDNA,PCR扩增PRM1基因(编码鱼精蛋白1)和CDH1基因(编码上皮细胞钙黏蛋白),验证所提取的RNA是否受体细胞RNA和基因组污染.结果表明:用Percoll密度梯度法纯化绵羊精液较PBS直接洗涤法能更好地去除精液中的体细胞,但精子回收率低.Percoll+PBS密度梯度离心法纯化后精子提取的RNA较PBS直接洗涤法纯度较高,但浓度较低;TRIzol(65℃)法提取的精子RNA较TRIzol(65℃)+试剂盒法浓度较高,但纯度较低.两种精液纯化方法(Percoll+PBS密度梯度离心法和PBS直接洗涤法)结合两种精子RNA提取方法[TRIzol(65℃)法和TRIzol(65℃)+试剂盒法]获得的精子RNA均能检测到PRM1基因,未检测出CDH1基因.说明Percoll密度梯度离心法纯化精子结合TRIzol(65℃)+试剂盒法提取精子RNA效果较好,无体细胞污染,且纯度较高.
Optimization of sheep sperm RNA extraction scheme

任秀美奥、姚旭东、蒙亚琦、郭延华、唐红、张译元、王立民、周平

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石河子大学动物科技学院,新疆石河子832000

新疆农垦科学院省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室,新疆石河子832000

绵羊精液 RNA提取 Percoll溶液 PBS溶液 鱼精蛋白1 上皮细胞钙黏蛋白 TRIzol

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2015AG0112019CB0022016ZX08008001

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ISSN：
年,卷(期)：2022.(9)
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