摘要
为了对从广东地区若干个屠宰场采集的164份疑似猪肺炎支原体感染的猪肺脏组织进行猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopnieumnoniiae,MHp)的分离鉴定,并了解其主要抗原蛋白基因的遗传变异特点,试验先对采集的肺脏组织进行16S rRNA基因PCR检测,阳性样本进行病原的分离培养、形态学观察、双重PCR鉴定、分离株主要抗原蛋白膜蛋白P46全基因与黏附蛋白P97基因R1R2区序列分析及效价的测定.结果表明:164份临床样本经16S rRNA鉴定后102份为MHp阳性,阳性率为62.2％;阳性样本接种江苏二号(KM2)液体培养基生长良好,颜色呈规律性变黄,在固体培养基上均能呈现特异性菌落形态;各代次分离菌株经16S rRNA双重PCR鉴定均能获得3个大小约1 000 bp的目的条带,测序结果与国内外MHp各参考株核苷酸相似性为96.42％～98.21％,说明3株分离株均属于MHp,且可稳定遗传,分别命名为JM-24、JM-39、JM-44,分离株生长效价可达1×105 67 CCU/mL;3株分离株主要抗原蛋白P46全基因和P97基因R1R2区与各参考株核苷酸相似性分别为96.0％～99.3％、97.8％～99.1％,其中P46全基因与参考株核苷酸同源性最高的为ES-2L株(登录号为CP058578.1),最低的为168株(登录号为CP002274.1)、168-L株(登录号为CP003131.1)、GDZJ01株(登录号为KF032627.1);P97基因R1R2区与参考株核苷酸同源性最高的为F7.2C株(登录号为CP034597.1),同源性最低的为168/GDZJ01株,P97基因R1R2区与国内外各致病菌株演绎的氨基酸序列同源性为72.3％～96.9％,其中分离株JM-44氨基酸序列在128～150位点存在缺失或变异,P46基因与P97基因R1R2区系统发育分析结果均表明JM-44分离株与国内外标准株及疫苗株(J株/168株)亲缘关系较远.说明我国广东地区MHp流行株与目前市场疫苗流行株遗传变异较大,提示现有疫苗对猪支原体肺炎的保护率可能下降.
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