犬冠状病毒TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

Establishment of a TaqMan real-time quantitative RT-PCR detection method for Canine coronavirus

侯凯文 ¹刘婉宁 ¹王金涛 ¹郑家三¹

扫码查看

作者信息

1. 黑龙江八一农垦大学动物科技学院,黑龙江大庆163319
折叠

摘要

为了建立犬冠状病毒(CCoV)的TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测方法,试验通过分析比对NCBI下载的犬冠状病毒(CCoV)全基因组序列,在其3'UTR保守区设计一对特异性引物及Taq-Man探针,经反应条件优化,建立CCoV的TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测方法.利用建立的检测方法检测CCoV标准品,绘制标准曲线,检测建立方法的特异性、敏感性和重复性,并对临床样品进行检测,且与普通RT-PCR检测结果进行比较,计算符合率.结果表明:标准曲线方程为y=3.25x+10.84,相关系数为0.996 4,在2.61×101～2.61×108拷贝/μL范围内具有良好的线性关系.除CCoV检测结果为阳性外,犬细小病毒、犬瘟热病毒、犬传染性肝炎病毒和犬副流感病毒检测结果均为阴性;检测下限为2.61×101拷贝/μL;批间和批内的变异系数均小于2％.建立的TaqMan实时荧光定量RT-PCR检出阳性临床样品9份,而普通RT-PCR检出阳性临床样品5份,两种检测方法的符合率为91.66％.说明建立的CCoV TaqMan实时荧光定量RT-PCR方法灵敏度高、特异性强、重复性好,可用于犬冠状病毒病的临床检测.

关键词

犬冠状病毒/荧光定量RT-PCR/引物/探针/3'UTR基因

引用本文复制引用

基金项目

黑龙江八-农垦大学三横三纵支持计划(TDJH201903)

出版年

2022

黑龙江畜牧兽医(下半月)

ISSN：

被引量1

参考文献量5

段落导航