黑龙江畜牧兽医(下半月)2022，Issue(9) ：119-129.DOI:10.13881/j.cnki.hljxmsy.2021.11.0019

BHK-21悬浮细胞培养条件筛选及回蹄疫病毒悬浮培养工艺研究

Screening of BHK-21 suspension cell culture conditions and study on suspension culture technology of Foot-and-mouth disease virus

施程洪 陆礼琼 李彦荣 吴海燕 段春平 李应福 赵路路 兰虎云 彭正啟 王继华 刘术新
黑龙江畜牧兽医(下半月)2022，Issue(9) ：119-129.DOI:10.13881/j.cnki.hljxmsy.2021.11.0019
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BHK-21悬浮细胞培养条件筛选及回蹄疫病毒悬浮培养工艺研究

Screening of BHK-21 suspension cell culture conditions and study on suspension culture technology of Foot-and-mouth disease virus

施程洪 1陆礼琼 1李彦荣 1吴海燕 1段春平 1李应福 1赵路路 1兰虎云 1彭正啟 1王继华 1刘术新1
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作者信息

  • 1. 中普生物制药有限公司,云南保山678000
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摘要

为了实现在幼地鼠肾细胞(BHK-21细胞)低血清全悬浮培养工艺下获得更高含量的口蹄疫病毒(FMDV),试验对比了 4株不同来源的BHK-21悬浮细胞的培养特性,按体积1％、2％和5％分别接种O型、A型FMDV,接种后4,8,12,16,20,24小时取样进行146S、半数致死量(LD50)对比研究,筛选形态良好、培养特性更稳定的BHK-21悬浮细胞株;以摇瓶悬浮培养筛选得到的BHK-21悬浮细胞株,使用O型FMDV O/HB/HK/99株、A型FMDV AF/72株,从接种剂量、活细胞密度(VCD)、病毒培养温度、病毒培养pH值、换液体积比例等工艺参数对病毒146S表达的影响进行了研究,并在7.5,50,500 L生物反应器中逐级放大,进行了 O型FMDV O/HB/HK/99株、A型FMDV AF/72株各3个批次病毒液悬浮培养研究,确定O型FMDV O/HB/HK/99株、A型FMDV AF/72株接种BHK-21悬浮细胞的培养工艺.结果表明:筛选得到1株形态良好、培养特性更稳定的BHK-21-CP005悬浮细胞株;O型FMDV O/HB/HK/99株、A型FMDV AF/72株在摇瓶低血清悬浮培养的BHK-21-CP005悬浮细胞株中增殖的最适条件为,当细胞培养48 h,VCD达4.5×106/mL,按体积2％接种O/HB/HK/99株和AF/72株,培养温度为36.5～37.0℃,pH值为7.30～7.50,按4:5体积比例换液,接种病毒16～20 h后收获病毒液,病毒146S含量不低于9.0 μg/mL,LD50不低于1×108.50/0.2mL.说明使用BHK-21-CP005株低血清全悬浮培养生产更高含量的FMDV工艺稳定,可以实现规模化生产.

关键词

口蹄疫病毒/BHK-21/低血清/反应器/悬浮培养/146S/半数致死量

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出版年

2022
黑龙江畜牧兽医(下半月)

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ISSN：
参考文献量11
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