黑龙江畜牧兽医(下半月)2022，Issue(10) ：70-74.DOI:10.13881/j.cnki.hljxmsy.2021.10.0127

牛结节性皮肤病病毒L1R基因的原核表达及多克隆抗体的制备

Prokaryotic expression of L1R gene of bovine Lumpy skin disease virus and preparation of polyclonal antibody

侯丽娜 刘晓婷 郭昊 刘春羽 赵洪哲 温永俊 王凤雪
黑龙江畜牧兽医(下半月)2022，Issue(10) ：70-74.DOI:10.13881/j.cnki.hljxmsy.2021.10.0127
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牛结节性皮肤病病毒L1R基因的原核表达及多克隆抗体的制备

Prokaryotic expression of L1R gene of bovine Lumpy skin disease virus and preparation of polyclonal antibody

侯丽娜 1刘晓婷 1郭昊 1刘春羽 1赵洪哲 1温永俊 1王凤雪1
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作者信息

  • 1. 内蒙古农业大学兽医学院农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室,呼和浩特010018
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摘要

为了获得牛结节性皮肤病病毒(Lumpy skin disease virus,LSDV)L1R蛋白及其多克隆抗体,试验根据GenBank已公布的LSDV L1R蛋白的编码区合成序列,将合成序列插入原核表达质粒pET-32a,构建pET32a-LlR重组阳性质粒,转化至BL21(DE3)大肠杆菌感受态,用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达.对诱导表达的重组蛋白采用镍离子亲和层析柱进行纯化,通过透析进行纯化蛋白的复性,用Western-blot对复性后的蛋白进行鉴定.将鉴定成功的蛋白免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体,采用间接ELISA测定多克隆抗体的效价.结果表明:L1R蛋白在大肠杆菌中高效表达,在1 mmol/L IPTG、37℃、200 r/min条件下,主要以包涵体的形式表达且纯度较高,表达的蛋白质分子质量约为40 ku,与预期的蛋白质大小一致.纯化后的L1R重组蛋白能被His单克隆抗体及山羊痘阳性血清识别,反应原性良好.制备的小鼠抗LSDV L1R多克隆抗体效价可达1∶102 400,免疫原性良好.说明试验成功在大肠杆菌中表达LSDV L1R重组蛋白,并制备获得多克隆抗体.

关键词

牛/结节性皮肤病病毒/L1R蛋白/原核表达/蛋白纯化/包涵体

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基金项目

内蒙古农业大学高层次人才引进项目(NDY2018-2)

内蒙古农业大学高层次人才引进项目(NDGCC2016-22)

出版年

2022
黑龙江畜牧兽医(下半月)

黑龙江畜牧兽医(下半月)

ISSN：
参考文献量2
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