摘要
为建立一种能同时检测大肠杆菌、乳房链球菌、金黄色葡萄球菌、无乳链球菌等4种病菌的多重PCR检测方法,研究针对大肠杆菌pauA基因、乳房链球菌pauA基因、金黄色葡萄球菌nuc基因、无乳链球菌cfb基因设计特异引物,通过对反应体系及反应条件的优化,成功建立了 一种高效准确的多重PCR检测方法.特异性试验结果显示,该方法能够特异性扩增4种目的致病菌,而其他病原菌未见扩增,具有较高特异性;灵敏性试验结果显示,该方法对大肠杆菌、乳房链球菌和无乳链球菌的最低检出限度为0.1 ng/μL、对金黄色葡萄球菌最低检出限度为1 ng/μL.采用多重PCR方法和单重PCR方法分别对湖南省采集的460份临床样品进行检测,结果显示二者符合率为100％.该研究为生产实践提供了一种快速、准确的奶牛乳房炎检测技术,可用于监测奶牛乳房炎和维持奶牛乳房健康.
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