摘要
细胞系表达的CD19可被靶向CD19的嵌合抗原受体(CAR)特异性识别.为探究靶向CD19 CAR-T抗肿瘤疗效及机制提供可靠稳定的靶细胞系,运用Lipofectamine 3000TM脂质体转染法将pPBDP-CD19和pSPBT质粒转入A549细胞.嘌呤霉素(Puro)筛选,稳定细胞株A549-CD19单克隆细胞由有限稀释法得到;RT-qPCR鉴定A549-CD19细胞系中CD19 mRNA的表达;流式细胞术检测A549-CD19中CD19的表达;MTS法比较改造前后细胞系的生长活性变化.经Puro抗性筛选和挑取单克隆,得到4个A549-CD19单克隆细胞;RT-qPCR鉴定A549-CD19细胞系均有CD19 mRNA高表达;流式检测单克隆细胞系阳性率均达到99％;MTS法检测发现A549-CD19细胞系与亲本细胞A549细胞具有一致的生长活性.运用PiggyBac转座系统构建稳定表达CD19的A549-CD19细胞系成功,为评估靶向CD19实体瘤CAR-T疗效提供靶细胞,奠定CAR-T细胞抗实体瘤疗效机制研究基础.
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