摘要
目的 设计并构建靶向 CCR7 基因 shRNA真核表达质粒,并检测其干扰效果.方法 以 CCR7 为靶基因设计具有短发夹结构的模板寡核苷酸,退火形成互补双链结构,再克隆至pGC-silencer-CRM30 载体,构建的3条重组短发夹shRNA表达载体分别命名为pGC-silencer-CRM30-CCR7 A、-CCR7 B 和-CCR7 C.采用测序法鉴定寡核苷酸序列.将构建好的真核表达载体转染人结肠癌SW480 细胞,荧光显微镜观察转染效果,RT-PCR法检测CCR7干扰效率.结果 重组质粒测序结果 与Genebank中的CCR7 cDNA序列相符,转染SW480细胞后,荧光显微镜下可观察到绿色荧光蛋白,RT-PCR结果 表明,pGC-silencer-CRM30-CCR7 C干扰效果最强.结论 靶向CCR7 基因shRNA表达载体构建无误,为进一步探讨趋化因子受体CCR7在胃肠道恶性肿瘤生物学行为中的作用奠定了基础.
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