华中医学杂志2009，Vol.33Issue(3) ：117-119.

人EGFP-TERT-VEGF-Bcl-xl shRNA重组腺病毒的构建与鉴定

Construction and identification of recombinant adenovirus vectors expressing GFP and human TERT-VEGF-Bcl-xl short hairpin RNA

陈晨 陶泽璋 陈始明 肖伯奎 王燕 陈伟
华中医学杂志2009，Vol.33Issue(3) ：117-119.
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人EGFP-TERT-VEGF-Bcl-xl shRNA重组腺病毒的构建与鉴定

Construction and identification of recombinant adenovirus vectors expressing GFP and human TERT-VEGF-Bcl-xl short hairpin RNA

陈晨 1陶泽璋 1陈始明 1肖伯奎 1王燕 1陈伟1
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作者信息

  • 1. 430060,武汉,武汉大学人民医院耳鼻咽喉-头颈外科研究所
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摘要

目的 构建表达绿色荧光蛋白(EGFP)和人端粒酶逆转录酶(TERT)、血管内皮生长因子(VEGF)、Bcl-xl基因shRNA的重组腺病毒载体,并对其相关指标进行鉴定,观察其对喉癌细胞(Hep-2)的感染效果.方法 用基因工程技术将EGFP和TERT、VEGF、Bcl-xl基因短发夹RNA(shRNA)的cDNA从质粒载体pGenesil-1.1上亚克隆至穿梭质粒pENTR-EGFP-VTB上,再通过体外同源重组的方法将EGFP-VEGF-TERT-Bcl-xl shRNA表达框转移至pGSadeno腺病毒表达载体上,得到腺病毒载体pGSadeno-EGFP-VTB,将Pac Ⅰ线性化的腺病毒DNA转染HEK293,并在其中包装扩增腺病毒.采用PCR方法对重组腺病毒进行鉴定,利用穿梭质粒中所携带EGFP报告基因,进行病毒滴度的测定和对 Hep-2细胞感染效率的检测.结果 酶切鉴定及PCR结果证明EGFP-TERT-VEGF-Bcl-xl shRNA重组腺病毒载体构建成功,病毒滴度达1.0×109PFU/ml,对Hep-2细胞有较强感染能力.结论 应用体外同源重组方法成功构建了表达EGFP和TERT-VEGF-Bcl-xl基因shRNA的重组腺病毒载体.

关键词

腺病毒/质粒/基因治疗

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基金项目

国家自然科学基金(30471873)

国家自然科学基金(30672313)

国家自然科学基金(30740012)

出版年

2009
华中医学杂志
中华医学会武汉分会

华中医学杂志

影响因子：0.271
ISSN：1007-5534
被引量1
参考文献量1
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