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N端携带HBGAs受体结合表位的兔出血症病毒嵌合VP60蛋白的表达及其免疫原性

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将HBGAs受体结合表位插入兔出血症病毒(RHDV)衣壳蛋白VP60的N端,分析嵌合VP60蛋白的表达及病毒样颗粒(VLPs)形成情况,并研究N端HBGAs受体结合表位的插入对嵌合VP60蛋白免疫原性的影响.通过VP60蛋白N端起始位点HBGAs受体结合表位的插入,获得表位插入的VP60基因.利用Bac-to-Bac系统构建杆状病毒重组质粒,命名为Bacmid-VP60-CR,转染Sf9昆虫细胞后,得到重组杆状病毒rBac-VP60-CR,经HA、IFA和Western Blot鉴定,结果显示,重组蛋白VP60-CR在Sf 9昆虫细胞中得到高效表达,电镜观察显示其可形成与VP60类似的VLPs结构.将重组蛋白免疫2月龄RHDV血清阴性的新西兰兔,200 µg/只,免疫后每周采血检测HBGAs表位抗体水平,同时在免疫后14 d,以RHDV WF株攻毒观察VP60-CR重组蛋白的免疫保护效果.结果显示,与VP60对照相比,VP60-CR蛋白可产生更高水平的针对HBGAs表位的抗体水平,且VP60-CR免疫兔可完全抵抗RHDV强毒的攻击.本研究构建了一种N端插入HBGAs受体结合表位的嵌合VP60蛋白,为研究高免疫原性兔出血症基因工程疫苗抗原奠定了基础.

董文宇、刘维龙、胡波、范志宇、魏后军、仇汝龙、宋艳华、陈萌萌、葛雷、熊富强、王芳

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西藏农牧学院,西藏林芝 860000

江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程重点实验室,江苏南京 210014

兽用生物制品(泰州)国泰技术创新中心,江苏泰州 225300

南京农业大学,江苏南京 210095

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兔出血症病毒 VP60蛋白 HBGAs 病毒样颗粒 免疫原性

江苏省农业科技自主创新资金现代农业产业技术体系建设专项

CX231028CARS-43-C-1

2024

10.15889/j.issn.1002-1302.2024.12.024

江苏农业科学
江苏省农业科学院

江苏农业科学

CSTPCD北大核心
影响因子：0.732
ISSN：1002-1302
年,卷(期)：2024.52(12)