摘要
为研究绵羊肺源大肠杆菌cyaA基因的分子特征、抗原性及其遗传进化关系,采用PCR技术对绵羊肺源大肠杆菌XJ10菌株的cyaA基因进行扩增、克隆并测序,应用定量PCR检测cyaA基因在不同培养阶段的mRNA表达量,利用在线软件对其进行编码蛋白分子特征、抗原性及其遗传进化分析.结果显示,cyaA基因全长2 547 bp,编码848个氨基酸;cyaA基因在细菌对数期的mRNA表达量最高,其次是稳定期及迟缓期,在衰亡期的mRNA表达量最低;氨基酸序列分析发现,分子式为C4 389H6 759N1 193O1 273S30,理论分子质量为97.57 ku,理论等电点为5.82,为酸性亲水性蛋白,稳定性较低;二级结构中 α-螺旋、无规则卷曲、延伸链和β-折叠所占比例分别为42.81％、39.03％、14.27％和3.89％.AC蛋白无信号肽与跨膜区,保守结构域位于1～848位氨基酸,属于腺苷酸环化酶超家族,具有14个开放阅读框,存在81个磷酸化位点.AC蛋白B细胞优势表位共16个,分别位于第44～51、61～65、248～250、259～267、296～304、355～366、436～439、456～456、476～481、489～490、540～559、589～597、634～640、717～722、766～773、806～806区段;遗传进化分析发现大肠杆菌XJ10菌株AC蛋白与志贺氏菌AC蛋白相似性最高.本试验结果为进一步研究大肠杆菌AC蛋白的功能及其作为大肠杆菌疫苗候选抗原奠定了基础.
基金项目
新疆生产建设兵团重点领域科技攻关计划(2021AB012)
新疆生产建设兵团重点领域科技攻关计划(2019AB029)
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