摘要
制备抗新型鹅星状病毒Cap蛋白的单克隆抗体,为建立基于病毒Cap蛋白的快速诊断方法奠定基础.构建pET-32a-ORF2重组质粒,转化BL21、IPTG诱导,原核表达出新型鹅星状病毒Cap蛋白,并对其分别进行SDS-PAGE和Western Blot鉴定.结果表明,重组蛋白主要以包涵体的形式表达且具有一定的免疫学活性.以原核表达的Cap蛋白为免疫原,免疫6～8周龄BALB/c雌性小鼠,对免疫后血清效价为阳性的小鼠取其脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合.做间接ELISA筛选出阳性克隆,并以有限稀释法连续进行3次亚克隆,成功筛选出1株分泌抗新型鹅星状病毒Cap蛋白抗体的杂交瘤细胞株,命名为1D7,采用腹水法大量制备单克隆抗体,效价可达1∶64 000.鉴定出1D7的亚型为IgM.1D7分别与重组Cap蛋白和接种新型鹅星状病毒的LMH细胞进行Western Blot分析,发现该单抗既能识别重组Cap蛋白又能与新型鹅星状病毒发生特异性反应.
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