目的在人类免疫缺陷病毒-1(HIV-1)慢病毒载体中引入三种不同的内部启动子来驱动绿色荧光蛋白基因(GFP)的表达,初步比较内部启动子的效率.方法慢病毒载体三质粒系统中,转移质粒的构建采用限制性内切酶酶切、T4 DNA连接酶连接方法和内切酶酶切鉴定.磷酸钙沉淀法将三质粒共转染293T包装细胞.病毒滴度的测定采用6孔板培养感染细胞,荧光显微镜计数GFP阳性细胞.通过荧光显微镜观察绿色荧光的表达情况判断启动子的效率.结果构建了含PPT元件和含不同内部启动子和GFP的质粒.转染293T细胞后均观察到较强的绿色荧光.表达荧光的293T细胞数以巨细胞病毒(CMV)启动子最多,肝细胞特异性启动子(LSP)较少,泛醌启动子(PUB)介于两者之间.CMV为内部启动子的慢病毒载体滴度5×106 IU/ml,其他二种启动子的滴度(1～2)×105 IU/ml.结论在所选择的三种内部启动子中,CMV启动子的效率最高,LSP较强,PUB介于两者之间.
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