目的:探究荣筋拈痛方通过调控LncRNA H19/miR-675-3p对膝骨关节炎(KOA)大鼠软骨细胞基质代谢及增殖的影响.方法:30 只大鼠分为空白血清组和荣筋拈痛方含药血清组,每组 15 只,分别给予等量生理盐水和荣筋拈痛方药液灌胃,制备空白血清和荣筋拈痛方含药血清.提取原代软骨细胞并采用Ⅱ型胶原免疫细胞化学法和甲苯胺蓝染色进行鉴定.采用IL-1β 10 ng/mL干预 24 h构建软骨细胞退变模型,分为空白组、模型组和荣筋拈痛方组.观察各组软骨细胞中lncRNA H19、miR-675-3p、Collagen Ⅱ、Aggrecan、PCNA基因相对表达水平,Collagen Ⅱ、Aggrecan、PCNA蛋白表达情况,EdU细胞增殖试剂盒检测各组软骨细胞增殖情况.结果:原代软骨细胞成簇生长,胞核清晰可辨,胞浆丰富,软骨细胞活力随传代次数的增加而下降.软骨细胞细胞外基质中的Collagen Ⅱ 被染成棕黄色,苏木素将细胞核染成蓝色;甲苯胺蓝染色后细胞整体呈现蓝紫色.与空白组比较,模型组中LncRNA H19、miR-675-3p基因相对表达水平均下降(P<0.05);与模型组比较,荣筋拈痛方组LncRNA H19、miR-675-3p基因相对表达水平上升(P<0.05).与空白组比较,模型组CollagenⅡ、Aggrecan、PCNA基因和蛋白相对表达水平均下降(P<0.05);与模型组比较,荣筋拈痛方组Collagen Ⅱ、Aggrecan、PCNA基因和蛋白相对表达水平均上升(P<0.05).与空白组比较,模型组中软骨细胞EdU阳性细胞率降低(P<0.05);与模型组比较,荣筋拈痛方组EdU阳性细胞率上升(P<0.05).结论:荣筋拈痛方可通过上调LncRNA H19/miR-675-3p促进Collagen Ⅱ、Aggrecan、PCNA表达,抑制细胞外基质降解,促进软骨细胞增殖,起到治疗KOA的作用.
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