本研究旨在比较分析灵芝属不同种线粒体基因组的特征、进化和亲缘关系.组装并注释3种未报道的灵芝线粒体基因组,结合GenBank中已报道的7种比较线粒体基因组差异;通过保守编码蛋白基因分析进化情况,构建系统进化树分析不同种灵芝亲缘关系.结果表明,灵芝线粒体基因组为63.616~107.774 kb的闭环结构,包含14个普通编码蛋白基因,1个rps3基因,2个RNA亚基基因以及23~29个tRNA基因.普通编码蛋白基因遗传距离均小于0.12,Ka/Ks<1,说明基因均受纯化选择,相对保守,并未发生快速的进化;内含子数量在11~39个,cox1基因所含内含子数最多且种间差异大;内含子中主要包含RNA聚合酶、GIY-YIG归巢内切酶或LAGLIDADG归巢内切酶结构域;tRNA基因存在插入、缺失与突变,普通编码蛋白基因排列顺序大部分是高度一致的,但也存在部分灵芝线粒体基因发生倒置与转换.此外,亲缘关系分析结果显示白肉灵芝(Ganioderma leucocontextum)与10种灵芝的亲缘关系最远,与基因顺序分析结果相一致.综上,不同种灵芝线粒体基因组差异主要表现在tRNA基因与内含子数量的不同;线粒体上的基因相对保守;白肉灵芝与其他灵芝亲缘关系最远.