摘要
[目的]本研究旨在通过对一个新的长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)及其共表达基因在家蚕Bombyxmori中的表达和功能进行分析,进一步阐明lncRNA在调控家蚕变态发育中的分子机制.[方法]基于前期家蚕脂肪体转录组测序数据,我们发现在蜕皮激素20E(2 μg/μL)处理5龄幼虫早期的脂肪体中lncRNA63表达显著上调,家蚕激素受体基因Hr3与之共表达.利用qRT-PCR对lncRNA63和Hr3在家蚕不同发育时期(4-5龄幼虫、蛹和成虫)、5龄幼虫不同组织(头、体壁、血淋巴、中肠、马氏管、脂肪体、丝腺、精巢和卵巢)和2 μg/μL 20E处理2,6,12和24 h后5龄幼虫脂肪体中的表达谱进行分析;采用核质分离检测和原位杂交技术检测lncRNA63在家蚕BmN细胞中的定位;利用dsRNA干涉家蚕5龄幼虫个体中lncRNA63的表达,并利用qRT-PCR检测RNA干涉lncRNA63对头、丝腺、脂肪体和体壁中Hr3表达的影响.[结果]qRT-PCR结果表明,1ncRNA63和Hr3在家蚕羽化前的蛹末期有一个表达高峰;二者在家蚕5龄幼虫头、体壁和丝腺中都有较高表达;lncRNA63和 Hr3在2 μg/μL 20E处理2,6和12 h的家蚕5龄幼虫脂肪体中较对照组(无水乙醇处理组)都显著上调,24 h下降到与对照组相当水平,二者的表达趋势完全一致.LncRNA63主要定位于BmN细胞核,但20E可诱导lncRNA63的核质迁移.利用dsRNA干涉lncRNA63表达后,Hr3的表达显著下调.[结论]20E不仅可调控lncRNA63的表达,还可诱导lncRNA63的核质迁移;lncRNA63可通过调控共表达基因Hr3的表达参与家蚕的变态发育过程.
基金项目
国家自然科学基金(32070503)
河南省科技厅科技攻关计划(202102110468)
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