摘要
[目的]本研究旨在明确ace-miR-3720在中华蜜蜂Apiscerana cerana工蜂幼虫肠道发育中的功能,并为进一步探究ace-miR-3720调控肠道发育的分子机理提供理论和实验依据.[方法]根据ace-miR-3720的核苷酸序列设计合成相应的模拟物mimic-miR-3720和抑制物inhibitor-miR-3720,通过饲喂中华蜜蜂工蜂幼虫对ace-miR-3720分别进行过表达和敲减.采用RT-qPCR检测过表达和敲减ace-miR-3720后4-6日龄幼虫肠道内ace-miR-3720及其靶基因CK Ⅰ,MAPK1和βGBP1的相对表达量;使用分析天平称重过表达和敲减ace-miR-3720后的幼虫肠道重量.[结果]相较于无义模拟物(nonsense mimic,mimic-NC)组,mimic-miR-3720 组中 ace-miR-3720 表达量在中华蜜蜂4和5日龄幼虫肠道中均极显著上调,在6日龄幼虫肠道中显著上调;相较于无义抑制物(nonsense inhibitor,inhibitor-NC)组,inhibitor-miR-3720 组中 ace-miR-3720 表达量在4 日龄幼虫肠道中极显著下调,在5和6日龄幼虫肠道中显著下调.ace-miR-3720与基因CK Ⅰ,MAPK1和βGBP1之间存在潜在靶向关系.与mimic-NC组相比,mimic-miR-3720组中CK Ⅰ表达量在4和5日龄幼虫肠道中皆极显著下调,在6日龄幼虫肠道中显著下调;MAPK1表达量在4日龄幼虫肠道中显著下调,在5和6日龄幼虫肠道中均极显著下调;βGBP1表达量在4日龄幼虫肠道中显著下调,在5和6日龄幼虫肠道中均极显著下调;此外,4和5日龄幼虫肠道重量均极显著降低,6日龄幼虫肠道重量显著降低.与inhibitor-NC组相比,inhibitor-miR-3720组中CK Ⅰ表达量在4-6日龄幼虫肠道中皆极显著上调;MAPK1表达量在4日龄幼虫肠道中显著上调,在5和6日龄幼虫肠道中极显著上调;βGBP1表达量在4和6日龄幼虫肠道中显著上调,在5日龄幼虫肠道中极显著上调;此外,4和6日龄幼虫肠道重量显著升高,5日龄幼虫肠道重量极显著升高.[结论]ace-miR-3720在中华蜜蜂工蜂幼虫肠道内真实存在;通过饲喂模拟物和抑制物可对中华蜜蜂工蜂幼虫肠道内分别实现miRNA的有效过表达和敲减;ace-miR-3720可能通过调控CK Ⅰ,MAPK1和βGBP1的表达影响中华蜜蜂工蜂幼虫肠道重量并参与幼虫肠道发育.
基金项目
国家自然科学基金(32172792.31702190)
现代农业产业技术体系建设专项(CARS-44-KXJ7)
福建农林大学硕士生导师团队项目(郭睿)()
福建农林大学杰出青年科研人才计划(xjq201814)
福建农林大学动物科学学院(蜂学学院)科研扶持项目()
维普
万方数据