昆虫学报2022，Vol.65Issue(12) ：1582-1591.DOI:10.16380/j.kcxb.2022.12.003

家蚕胚胎中胚胎发育因子基因BmEDF G4结构的验证及其结合蛋白的筛选

Verification of the G4 structure of the embryonic development factor(EDF)gene BmEDF from Bombyx mori embryos and screening of its binding protein

黄琼 彭玉玲 冯启理 牛康康
昆虫学报2022，Vol.65Issue(12) ：1582-1591.DOI:10.16380/j.kcxb.2022.12.003
✕
  • 维普
  • 万方数据

家蚕胚胎中胚胎发育因子基因BmEDF G4结构的验证及其结合蛋白的筛选

Verification of the G4 structure of the embryonic development factor(EDF)gene BmEDF from Bombyx mori embryos and screening of its binding protein

黄琼 1彭玉玲 1冯启理 1牛康康1
扫码查看

作者信息

  • 1. 华南师范大学生命科学学院,昆虫科学与技术研究所,广东省昆虫发育生物学与应用技术重点实验室,广州市昆虫发育应用重点实验室,广州510631
  • 折叠

摘要

[目的]本研究旨在通过寻找家蚕Bombyx mori胚胎发育因子(embryonic development factor,EDF)基因BmEDF G-四链体(G-quadruplex,G4)结构的结合蛋白,进一步探究G4结构调控家蚕胚胎发育的可能作用和机制.[方法]通过圆二色谱(circular dichroism,CD)和凝胶迁移实验(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)验证G4序列在体外是否形成G4结构;通过启动子活性实验验证BmEDF启动子区G4结构对BmEDF的表达调控的影响;通过qRT-PCR检测BmEDF在家蚕胚胎发育各时期的表达量变化.通过EMSA联合质谱分析可能与BmEDF的G4结构结合的蛋白,然后将与G4结构结合的2个候选蛋白BmeIF4H和BmADDH分别进行基因克隆、表达和纯化,再通过EMSA实验分别验证候选蛋白BmeIF4H和BmADDH与BmEDF的G4结构结合与否.[结果]CD和EMSA实验都证明BmEDF的G4序列在体外可以形成G4结构.启动子活性实验表明BmEDF G4结构的存在对BmnEDF转录表达具有正调控的作用.qRT-PCR结果表明BmEDF在产卵后120 h时表达量显著升高.经原核表达纯化,获得BmeIF4H和BmADDH重组蛋白.EMSA实验表明重组蛋白BmeIF4H在体外与BmEDF的G4结构结合,BmADDH不与BmEDF G4结构结合.[结论]家蚕胚胎中的BmeIF4H蛋白可能与BmEDF的G4结构结合.本研究为解析家蚕胚胎发育的DNA高级结构调控机理提供了实验证据.

关键词

家蚕/胚胎发育/DNA高级结构/G-四链体/结合蛋白

引用本文复制引用

基金项目

出版年

2022
昆虫学报
中国科学院动物研究所,中国昆虫学会

昆虫学报

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：0.756
ISSN：0454-6296
被引量1
参考文献量1
段落导航相关论文