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烟草甲攻击素基因LsAttacin2的表达及其在抗细菌胁迫中的作用

Expression of attacin gene LsAttacin2 of Lasioderma serricorne(Coleoptera:Anobiidae)and its role in resisting bacterial stress

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[目的]本研究旨在阐明烟草甲Lasioderma serricorne幼虫体内攻击素(attacin)基因LsAttacin2在响应细菌侵染过程中的功能.[方法]利用RT-PCR扩增烟草甲LsAttacin2的cDNA全长序列;利用RT-qPCR检测LsAttacin2 在烟草甲不同发育阶段(卵、低龄幼虫、高龄幼虫、蛹、低龄成虫和高龄成虫)、4龄幼虫不同组织(头、表皮、前肠、中肠、后肠、脂肪体和马氏管)、大肠杆菌Escherichia coli和金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus侵染及其肽聚糖处理4龄幼虫后的相对表达量;通过注射法利用RNAi沉默烟草甲4龄幼虫LsAttacin2的表达后,检测大肠杆菌和金黄色葡萄球菌侵染烟草甲4龄幼虫后的死亡率.[结果]克隆获得烟草甲LsAttacin2(GenBank登录号:MT635176)的cDNA全长序列,其开放阅读框长504 bp,编码167个氨基酸残基,LsAttacin2 N端存在信号肽,C端具有Attacin_C超家族的保守结构域.RT-qPCR结果表明,LsAttacin2在烟草甲测试的各发育阶段均有表达,且在高龄幼虫和蛹中高表达;LsAttacin2主要在4龄幼虫中肠、表皮和脂肪体等免疫组织中表达;大肠杆菌和金黄色葡萄球菌及其肽聚糖均诱导了烟草甲4龄幼虫体内LsAttacin2的上调表达.RNAi结合细菌生物测定结果表明,dsLsAttacin2注射组4龄幼虫中LsAttacin2的表达量在注射24和48 h时较对照组(注射dsGFP)分别显著下降了 72.8％和80.4％;RNAi后48 h,与注射dsGFP的对照组相比,dsLsAttacin2注射组大肠杆菌和金黄色葡萄球菌侵染24 h时4龄幼虫的死亡率分别提高了 21.1％和24.4％.[结论]本研究结果表明LsAttacin2可能在烟草甲抗细菌的免疫应答过程中起着重要作用.

夏鹏亮、严毅、宋兴宜、黄勇、杨文佳

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湖北省烟草公司恩施州公司,恩施445000

贵阳学院生物与环境工程学院,贵州省山地珍稀动物与经济昆虫重点实验室,贵阳550005

烟草甲 攻击素 基因表达 细菌侵染 免疫 RNA干扰

中国烟草总公司科技项目湖北省烟草公司科技项目贵阳学院专项

110202102040027Y2020-006GYU-KY-2022

2023

10.16380/j.kcxb.2023.04.007

昆虫学报
中国科学院动物研究所,中国昆虫学会

昆虫学报

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：0.756
ISSN：0454-6296
年,卷(期)：2023.66(4)
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