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白纹伊蚊nAChR-α5基因RNA干扰体系的构建及其在双氧木脂素A抗性中的作用

Construction of RNA interference system of nAChR-o5 gene in Aedes albopictus(Diptera:Culicidae)and its role in haedoxan A resistance

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[目的]探究白纹伊蚊Aedes albopictus烟碱型乙酰胆碱受体α5(nicotinic acetylcholine receptorα5,nAChR-α5)亚基是否是双氧木脂素A(haedoxan A,HA)潜在的作用靶标,为白纹伊蚊的有效防治提供参考.[方法]利用PCR克隆白纹伊蚊nAChR-α5编码区(coding sequence,CDS)序列并构建系统发育树;利用RT-qPCR检测白纹伊蚊nAChR-α5在不同发育阶段(1-4龄幼虫、蛹和未吸血的雌成蚊)的表达量;利用壳聚糖/dsRNA纳米颗粒介导RNAi技术敲减白纹伊蚊2龄幼虫nAChR-α5的表达量;生物测定RNAi后的白纹伊蚊3龄幼虫对HA[LC30(0.3 mg/L)和LC50(0.4 mg/L)]的敏感性.[结果]白纹伊蚊nAChR-α5的CDS长1 296 bp,编码431个氨基酸,具有nAChR的典型半胱氨酸环(Cys-loop).蛋白序列比对和系统发育树表明白纹伊蚊nAChR-α5与埃及伊蚊A.aegypti的nAChR-α5同源性最高,亲缘关系最近.nAChR-α5在白纹伊蚊4龄幼虫中的表达量最高,其次是在雌成虫中的;饲喂壳聚糖/dsnAChR-α5纳米颗粒(dsRNA浓度为0.3％w/w)后24h时对白纹伊蚊2龄幼虫nAChR-α5的干扰效率最高,达到70％.生测结果表明,与饲喂不含dsRNA饲料的空白对照和饲喂含有壳聚糖/dsGFP纳米颗粒饲料的阴性对照相比,在LC30和LC50的HA处理下,敲减nAChR-α5组的白纹伊蚊3龄幼虫死亡率显著下降9.89％～15.45％,表明敲减nAChR-α5使白纹伊蚊对HA的敏感性显著降低.[结论]白纹伊蚊nAChR-α5可能是HA潜在的作用靶标之一,HA可能通过干扰白纹伊蚊nAChR-α5的功能进而影响神经兴奋传导.

Aedes albopictushaedoxan AnAChR-α5RNAi technologychitosan/dsRNA nanoparticles

任芸皓、郝焕焕、左亚运、裴雅琨、胡兆农

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西北农林科技大学植物保护学院,杨凌712100

陕西省植物源农药研究与开发重点实验室,杨凌712100

白纹伊蚊 双氧木脂素A nAChR-α5 RNAi技术 壳聚糖/dsRNA纳米颗粒

国家自然科学基金

31672055

2023

10.16380/j.kcxb.2023.05.008

昆虫学报
中国科学院动物研究所,中国昆虫学会

昆虫学报

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：0.756
ISSN：0454-6296
年,卷(期)：2023.66(5)
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