基于芬顿试剂(H2 O2/Fe2+)-亚甲基蓝(MB)体系,提出了褪色分光光度法测定人血清中过氧化氢酶(CAT)活性.取样品10μL,加入1 mmol•L-1 H2 O2底液3.00 mL,于30℃恒温反应15 min,加入1.00 mol•L-1 H2 SO4溶液1.00 mL终止酶促反应,充分振荡后依次加入0.10 mmol•L-1 MB溶液5.00 mL和0.01 mol•L-1 FeSO4溶液1.00 mL,室温反应5 min后用水定容至50 mL.以水为参比,测定体系在波长665 nm处的吸光度,随同测定CAT空白体系吸光度,以二者差值(ΔA)计算CAT活性.结果表明:还原型染料MB于665 nm处有最大吸收,摩尔吸光系数为9.5×104 L•mol-1•cm-1,Fe2+催化H2 O2氧化MB发生褪色反应,CAT对其具有抑制作用;CAT活性在0.01～0.06 U•mL-1内与ΔA呈线性关系,检出限(3s/k)为0.0024 U•mL-1;方法用于6个不同年龄健康人血清样品分析,结果显示CAT活性为36.3～63.2 U•mL-1,并且儿童和老人血清中CAT活性明显高于成年人,测定值的相对标准偏差(n=6)为1.7％～3.6％,加标回收率为92.0％～104％.
万方数据
维普
