取 5 g 乳粉样品,用适量 40～45℃水溶解后,用水稀释至 100 mL.分取 1 mL,与50μL 1 000 mg·L-1(以胆碱-1,1,2,2-d4 计)氯化胆碱-1,1,2,2-d4 内标溶液和 10 mL 1 mol·L-1 盐酸溶液混合,于 70℃加热 3h.冷却后用 500 g·L-1 氢氧化钠溶液调节上述溶液酸度至pH(5.0±0.1),用水稀释至 100 mL.分取上述溶液 1 mL,用体积比 95∶5 的乙腈和 10 mmol·L-1甲酸铵溶液的混合溶液稀释至 10 mL,过 0.22 μm 有机滤膜,滤液供高效液相色谱-单四极杆质谱仪分析.在色谱分析时,以ACQUITY UPLC BEH HILIC色谱柱作固定相,以不同体积比的乙腈和 10 mmol·L-1 甲酸铵溶液-甲酸混合溶液(p H 5.0)的混合溶液作流动相进行梯度洗脱;在质谱分析时,以电喷雾离子源正离子(ESI+)模式电离,以选择离子监测(SIM)模式检测,内标法定量.结果显示:胆碱的质量浓度在 10.0～200 μg·L-1 内与对应峰面积与胆碱-1,1,2,2-d4 峰面积的比值呈线性关系,检出限(3 S/N)为 1 mg/100 g;按照标准加入法进行回收试验,回收率为 96.2%～100%;对 3 个实际样品进行日内、日间精密度试验,胆碱测定值的相对标准偏差分别为 0.90%～3.3%(n=11)和 1.6%～2.5%(n=9);方法用于和国家标准GB 5413.20-2013 中酶比色法进行比对,15 种实际乳粉样品中胆碱测定值的相对误差的绝对值均不大于 8.0%.
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