摘要
目的 探讨β-雌二醇(E2)对IL-36β诱导的小鼠脾脏单个核细胞中JAK/STAT、PI3K/AKT信号通路蛋白磷酸化的调控及IL-17A表达的影响.方法 从6～8周龄SPF级C57BL/6雌性小鼠分离脾脏并研磨制备细胞混悬液,通过密度梯度离心法分离获单个核细胞悬液.将单个核细胞悬液等量移入4个培养皿中,每皿细胞数为1.5×107个,分为正常组、E2组、IL-36β组和IL-36β+E2组,其中IL-36β浓度为10 ng/mL,E2浓度为1×10-8 mol/L,作用30 min后采用Western blot检测IL-36β和E2刺激单个核细胞中JAK/STAT和PI3K/AKT蛋白磷酸化的变化.按上述分组及细胞量,分别采用IL-36β、E2、JAK抑制剂与PI3K抑制剂作用于单个核细胞后,采用qRT-PCR、Western blot检测6、12、24 h的IL-17A mRNA及24 h的IL-17A表达.结果 Western blot结果显示,IL-36β组中P-JAK3、P-STAT2、P-AKT表达均较正常组升高,而IL-36β+E2组中上述因子表达均低于IL-36β组,P-JAK3、P-AKT表达低于正常组.正常组、E2组、IL-36β组和IL-36β+E2组IL-17A mRNA在6、12、24 h 3个时间段的表达差异有统计学意义(F值分别为25.50、127.04、9.76,均P<0.01);四组中IL-17A mRNA在IL-36β组的表达最高,而IL-36β+E2组低于IL-36β组.IL-36β、JAK抑制剂、PI3K抑制剂分别刺激小鼠脾脏单个核细胞24 h后,与正常组相比,IL-36β组IL-17 A表达上调,而IL-36β+JAK抑制剂、IL-36β+AKT抑制剂组IL-17A表达下调.结论 IL-36β激活小鼠脾脏单个核细胞中JAK3/STAT2和PI3K/AKT蛋白磷酸化来上调IL-17A表达.E2可抑制IL-36β对上述单个核细胞中JAK3/STAT2和PI3K/AKT的通路蛋白磷酸化并下调IL-17 A的表达.
基金项目
国家自然科学基金(81872532)
广东省科技创新战略专项基金(2021 A1515011218)
广州市科技计划(202002030106)
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