以构建珍稀物种硬叶兜兰SSR-PCR反应体系,采取正交设计试验对硬叶兜兰SSR体系组分中的Mg2+、基因组DNA、DNA Taq聚合酶、dNTPs、引物5个因素在4个不同程度上进行了组合试验,之后对反应体系中该引物的退火温度在梯度PCR仪上筛选,并进行了最优体系的验证.试验结果显示:体积为10μL的PCR管中最优组合为:模板DNA 20 ng,Mg2+3.0 mmol/L,dNTPs 0.3 mmol/L,引物0.8μmol/L,Taq酶0.8 U,10×buffer(Mg2+Free)1μL,引物PR710的退火温度为59.6℃,说明该体系具有较好的实用性.
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