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光皮桦BlBLH1基因的克隆、表达及互作蛋白筛选

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[目的]BLH基因家族是广泛存在于植物中的转录因子,其与KNOX等转录因子的互作被认为在植物的次生壁发育中起重要调控作用.本研究拟克隆光皮桦BlBLH1基因,分析其表达模式,并筛选能与其互作的蛋白.[方法]利用Blast等软件在光皮桦基因组序列中鉴定获得BlBLH1序列,克隆验证后对其进行多序列比对、系统进化等生物信息学分析;利用实时荧光定量PCR分析BlBLH1在光皮桦不同组织、器官和应拉木形成中的表达模式;通过酵母双杂交技术筛选BlBLH1互作的蛋白,并采用双分子荧光互补实验(BiFC)进一步验证其与部分蛋白在拟南芥细胞内的互作.[结果]BlBLH1基因序列全长为2128 bp,开放阅读框(ORF)为1830 bp,编码609个氨基酸,具有SKY、BEL和HD 3个保守结构域.系统进化分析显示,BlBLH1与拟南芥BLH1有最近的同源关系.表达分析显示BlBLH1在雄花序中的表达量最高;在木质化茎段中的表达量次之;在应拉木诱导过程中,BlBLH1在应拉木中的表达量均显著高于对照.通过酵母双杂交筛选获得结构蛋白、酶、转录因子等47个与BlBLH1互作较强的蛋白;BiFC验证结果表明,BlBLH1与BlKNOX4、BlKNOX9在拟南芥原生质体内存在互作关系.而且,三者在茎段和应拉木的表达趋势基本一致.[结论]可从光皮桦中分离获得BlBLH1基因,生物信息学、表达和蛋白互作分析的结果表明BlBLH1参与光皮桦木材形成过程,且存在与KNOX蛋白的互作关系.
Cloning, Expression and Interaction Protein Screening of BlBLH1 Gene in Betula luminifera

庄和必、俞子承、林二培、黄华宏

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浙江农林大学 亚热带森林培育国家重点实验室 杭州 311300

BlBLH1 次生壁 酵母双杂交 双分子荧光互补

国家自然科学基金浙江省重点研发计划

317706412021C02037

2022

10.11707/j.1001-7488.20220307

林业科学
中国林学会

林业科学

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：1.272
ISSN：1001-7488
年,卷(期)：2022.58(3)
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