[目的]筛选巨桉金属耐受蛋白基因EgMTP6,分析其生物信息学特征、亚细胞定位、锌转运功能和表达模式,揭示丛枝菌根真菌、锌、磷与EgMTP6的相互关系,探究其在缓解锌胁迫中的作用.[方法]通过生物信息学分析,得到EgMTP6的核苷酸和氨基酸序列特征.利用农杆菌注射烟草叶表皮细胞分析EgMTP6的亚细胞定位,酵母突变体互补分析EgMTP6转运锌的功能.利用荧光定量PCR技术,分析锌(ZnSO4)、磷(NaH2PO4)和异形根孢囊霉对EgMTP6表达模式的影响.[结果]基因预测显示:EgMTP6包含一个长度为1 524bp的开放阅读框,编码507个氨基酸,包含12个外显子和11个内含子.结构预测显示:EgMTP6蛋白氨基端位于膜内侧,羧基端位于膜外侧,包含5个跨膜螺旋和HD-HD基序.系统进化分析表明:EgMTP6属于Group6,归为Fe/Zn-CDF类群.多序列比对发现,MTP6含有亚铁离子外排泵结构(Ferrous-iron efflux pump,FieF).亚细胞定位显示EgMTP6定位在内质网,酵母突变体互补表明EgMTP6是锌转运蛋白.荧光定量结果说明:EgMTP6的表达不受锌浓度影响,但受高浓度磷和异形根孢囊霉诱导.[结论]EgMTP6属于Fe/Zn-CDF类群,参与锌的转运,表达量不受锌浓度影响,高浓度磷处理和接种异形根孢囊霉时表达量显著提高.EgMTP6在分子特征和功能方面的研究有助于进一步探讨该基因在巨桉菌根耐受锌胁迫时的功能.
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