摘要
[目的]本文旨在了解猪核心蛋白聚糖基因(Decorin,Dcn)的序列特征、蛋白结构和性质,探讨其在猪卵巢颗粒细胞凋亡过程中的作用.[方法]利用PCR扩增和测序技术获得猪Dcn基因编码区序列并进行生物信息学分析;利用双酶切法构建猪Dcn基因的过表达载体,瞬时转染至体外培养的猪卵巢颗粒细胞中,利用RT-qPCR和Western blot技术检测其mRNA和蛋白水平;利用流式细胞术检测猪卵巢颗粒细胞凋亡率.[结果]猪Dcn基因编码区核苷酸序列与哺乳动物其他物种在进化过程中均比较保守.猪Dcn基因编码蛋白含有360个氨基酸,有糖胺聚糖附着位点(GAS)等重要的保守结构域.成功构建了猪Dcn基因真核生物表达载体,转染体外培养的猪卵巢颗粒细胞后,发现Dcn过表达极显著上调了猪卵巢颗粒细胞凋亡率、促凋亡基因Bax mRNA与凋亡标志蛋白cleaved-Caspase3的表达水平,而Bcl-2/Bax值则显著降低.[结论]Dcn基因在哺乳动物的进化过程中比较保守,是猪卵巢颗粒细胞的促凋亡因子.
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