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人脂肪源性血管外膜细胞对CD34+造血干/祖细胞体外支持的实验研究

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目的 建立以人脂肪源性血管外膜细胞(human adipose-derived pericyte/perivascular cells，hAD-PCs)为基质层与人脐血(umbilical cord blood，UCB)CD34+造血干/祖细胞(hematopoietic stem/progenitor cells，HSPCs)共培养体系，评估hAD-PCs对UCB CD34+HSPCs的体外支持效力。方法 实验分3组，实验组(hAD-PCs组)以hAD-PCs为基质细胞与UCB CD34+HSPCs共培养;阳性对照组(BMSCs组)以骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs)为基质细胞与UCB CD34+HSPCs共培养;空白组(无基质细胞组)以UCB CD34+HSPCs单独培养。在共培养的1、2、4周，倒置显微镜下观察UCB CD34+HSPCs细胞形态;应用台盼蓝拒染法计算细胞数量;多参数流式细胞术分析血细胞标记CD45、CD34、CD33、CD19、CD10和CD14的表达;镜下观察UCB CD34+HSPCs培养后集落形成能力;通过酶联免疫吸附法(ELISA)检测造血因子分泌情况。结果 UCB CD34+HSPCs细胞增殖结果显示:hAD-PCs组及BMSCs组共培养的UCB CD34+HSPCs细胞数在第1周略有增长，无基质细胞组细胞数降低，组间比较差异无统计学意义(P>0。05);第2周时hAD-PCs组和BMSCs组细胞数继续增长达到高峰，无基质细胞组细胞数持续降低，hAD-PCs组、BMSCs组细胞数量均高于无基质细胞组(P均<0。05);第4周时hAD-PCs组和BMSCs组细胞数略有下降，无基质细胞组细胞全部死亡。hAD-PCs组和BMSCs组细胞计数各时间点差异无统计学意义(P均>0。05)。血细胞标记表达情况:hAD-PCs组和BMSCs组的全血细胞标记CD45+、造血祖细胞标记CD34+CD33-、淋巴细胞标记CD10+/19+和髓系细胞标记CD14+表达在1、2、4周差异均无统计学意义(P均>0。05)。UCB CD34+HSPCs集落形成结果显示:hAD-PCs组和BMSCs组在1、2、4周形成的集落数量差异均无统计学意义(P均>0。05)。细胞因子分泌情况:hAD-PCs组和BMSCs组IL-3、IL-6、TPO、IFN-γ 及TNF-α分泌水平差异均无统计学意义(P均>0。05);hAD-PCs组的SCF在1周时和G-CSF在2周时表达量高于BMSCs组(P=0。008;P=0。002);IL-2在2周时和VEGF、G-CSF和SCF在4周时hAD-PCs组的表达低于BMSCs组(P=0。01;P=0。04;P=0。02;P=0。004)。结论 以hAD-PCs作为基质层细胞在细胞形态和增殖能力方面具有与BMSCs相似的对UCB CD34+HSPCs体外支持作用，hAD-PCs是一种潜在良好体外支持UCB CD34+HSPCs的基质细胞。
Experimental Study on the Supporting Effect of Human Adipose-Derived Pericyte/Perivascular Cells on CD34+Hematopoietic Stem/Progenitor Cells in Vitro

周芮、杨婷婷、张磊、许飞、郑波

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宁夏医科大学,银川 750004

宁夏人类干细胞研究所,银川 750004

宁夏医科大学总医院血液内科,银川 750004

间充质干细胞 血管外膜细胞 共培养 造血支持

国家自然科学基金

81860028

2021

10.16050/j.cnki.issn1674-6309.2021.05.004

宁夏医科大学学报
宁夏医科大学

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CSTPCD
影响因子：0.84
ISSN：1674-6309
年,卷(期)：2021.43(5)
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