农业生物技术学报2021，Vol.29Issue(3) ：591-598.DOI:10.3969/j.issn.1674-7968.2021.03.018

膦丝菌素乙酰转移酶抗原表位分析及快速ELISA定量检测方法的建立

Antigen Epitope Analysis and Establishment of Rapid ELISA for Phosphinthricin Acetyltransferase

梁雨欣 李忠鹏 张春雨 侯吉超 李小宇 王永志
农业生物技术学报2021，Vol.29Issue(3) ：591-598.DOI:10.3969/j.issn.1674-7968.2021.03.018
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膦丝菌素乙酰转移酶抗原表位分析及快速ELISA定量检测方法的建立

Antigen Epitope Analysis and Establishment of Rapid ELISA for Phosphinthricin Acetyltransferase

梁雨欣 1李忠鹏 2张春雨 2侯吉超 1李小宇 2王永志3
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作者信息

  • 1. 吉林省农业科学院植物保护研究所,公主岭136100;吉林农业大学植物保护学院,长春130118
  • 2. 吉林省农业科学院植物保护研究所,公主岭136100
  • 3. 吉林省农业科学院植物保护研究所,公主岭136100;中国农业科学院植物保护研究所,北京100193
  • 折叠

摘要

随着转基因大豆(Glycine max)市场的扩大,我国对转基因大豆的食品安全、环境风险等问题争议日渐加剧.越来越多的国家要求对转基因食品进行标识,部分国家对转基因成分含量亦有要求.为了建立转Bar基因大豆的快速、有效检测方法,对转Bar基因大豆进行定量检测,本研究以纯化的膦丝菌素乙酰转移酶(phosphinothricin acetyltransferase,PAT)蛋白为抗原免疫小鼠(Mus musculus),成功制备了18株特异性良好的PAT单克隆抗体(monoclonal antibody,MAb),利用在大肠杆菌(Escherichia coli)中表达的PAT分段蛋白筛选到一组能进行夹心ELISA的配对单克隆抗体9F5和3G12,并以这对单抗为基础建立了PAT快速定量双抗夹心ELISA(double antibody sandwich ELISA,DAS-ELISA)检测方法.该方法以9F5为捕获抗体包被酶标板,检测抗体3G12经辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)标记后以2μg/mL的工作浓度与抗原在37℃共同孵育30 min,室温避光显色15～20 min.该检测方法检测限为1.69 ng/mL,对PAT蛋白的检测范围为0.5～8.0μg/mL,板内板间变异系数均小于10％.该法灵敏度高、稳定性好,1 h即可完成检测,为转Bar基因大豆的快速定量检测提供了技术支撑.

关键词

Bar基因/单克隆抗体/抗原表位/双抗夹心ELISA(DAS-ELISA)

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基金项目

出版年

2021
农业生物技术学报
中国农业大学 中国农业生物技术学会

农业生物技术学报

CSTPCDCSCD北大核心
影响因子：0.801
ISSN：1674-7968
参考文献量18
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