摘要
钩藤(Uncaria rhynchophylla)的药用成分钩藤碱和异钩藤碱受各种酶促反应基因调控,筛选钩藤qRT-PCR实验体系中的最佳内参基因,对影响钩藤药用成分基因的表达研究具有重要意义.本研究旨在筛选钩藤不同组织、不同遮光处理和不同乙烯处理条件下稳定表达的内参基因.以钩藤为材料,应用qRT-PCR分析β-肌动蛋白(β-actin,β-act)、α-微管蛋白(α-tubulin,α-tub)、18S核糖体RNA(18S ribosomal RNA,18S rRNA)、翻译延伸因子(translation elongation factor,ef-1)、甘油醛三磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,gapdh)、β-微管蛋白(β-tubulin,β-tub)、核糖体蛋白(ribosomal protein,rpl)和泛素连接酶(ubiquitin-ligase enzyme,ubc)共计8个内参基因在不同组织和不同处理下的表达变化,借助GeNorm程序确定内参基因数目,再结合NormFinder和BestKeeper程序对候选内参基因稳定性进行评价,随后通过几何平均值法对不同软件所得结果进行整合并明确综合排名.结果显示,在不同组织和处理中,皆可选用单一内参基因;在不同组织中,应选择ef-1作为内参基因;在遮光处理下,应选择gapdh作为内参基因;在乙烯处理下,ubc和β-act皆可作为内参基因;如果多种表达研究固定采用一个稳定性相对较好的内参基因,应当选择ubc.本研究为钩藤在不同实验体系中的相关基因表达分析提供了校正和标准化基因,有助于提高实验的准确性和可靠性.
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