摘要
猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophages,PAMs)是机体先天免疫第一防线的重要成员,其强可塑性为猪(Sus scrofa)的免疫调控机制解析提供了重要细胞模型.为建立猪肺泡巨噬细胞不同极化亚型及比较两种不同形式的PAMs与3D4/21细胞系极化的异质性与可逆性,本研究以30日龄健康大白仔猪分离的原代PAMs和商业化3D4/21细胞系为实验材料,利用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)加γ干扰素(interferon gamma,IFN-γ)组合和白介素4(interleukin 4,IL-4)进行极化诱导,分别构建M1和M2细胞模型.PCR和qRT-PCR相对定量结果显示,M1型标志基因IL-1β、趋化因子配体10(CXC chemokine ligand 10,CXCL10)、肿瘤坏死因子(tumour necrosis factor,TNF)、IL-6、IL-12B在PAMs和3D4/21细胞系M1型中的表达水平均显著高于在对照组(M0)和M2型中的表达水平(P<0.05).M2型标志基因精氨酸酶1(arginase-1,Arg1)、过氧化物酶体增殖剂激活受体γ(peroxisome proliferators-activated receptorγ,PPARγ)、IL-10和几丁质酶3样蛋白3(chitinase 3-like 3,Chi3L3或Ym-1)在3D4/21细胞系M2型中的表达水平显著高于在M0和M1型中的表达水平(P<0.05);而在PAMs中,Arg1、PPARγ和Ym-1在M0和M2型中的表达水平显著高于在M1型中的表达水平(P<0.05).Western blot结果显示,两类细胞Arg1蛋白表达变化与qRT-PCR相对定量结果相符.同时,对PAMs和3D4/21细胞系极化的可逆性实验结果表明,PAMs极化的可逆性强于3D4/21细胞系,且PAMs由M2型向M1型转换的能力强于由M1型向M2型转换的能力.本研究为进一步探索猪肺泡巨噬细胞极化机制及猪的抗病育种提供了基础资料.
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