摘要
雄性动物的繁殖能力受营养和能量代谢的影响,而AMP激活的蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)作为能量的感受器分子,在其生殖功能中起着重要作用,本实验旨在研究AMPK对饥饿诱导的绵羊(Ovis aries)睾丸间质细胞(leydig cells,LCs)自噬和凋亡的作用.采用绵羊LCs为实验材料,培养至第4代,分别用无血清培养液培养0、3、6、12、24 h后,利用Cell Counting Kit-8(CCK8)试剂盒检测细胞活力,筛选合适的处理时间.饥饿12 h,通过透射电镜和流式细胞术观察LCs的自噬和凋亡,qRT-PCR和蛋白免疫印迹(Western blot,WB)方法分别检测自噬及凋亡相关的基因和蛋白表达变化.结果表明,与对照组相比,饥饿诱导的LCs中自噬体增多,细胞凋亡率显著升高(P<0.05),并且自噬相关基因程序性死亡受体-1(programmed cell death-1,Beclin1)和微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)等基因表达量显著升高(P<0.05),Beclin1蛋白表达和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比率显著升高(P<0.05),促凋亡相关基因Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,BAX)等基因表达显著升高(P<0.05),抗凋亡相关基因B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)基因表达极显著降低(P<0.01),BAX/Bcl-2蛋白表达比率升高;AMP依赖的蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)/哺乳动物雷帕霉素蛋白激酶(mammalian target of rapamycin,mTOR)/UNC-51样激酶1(UNC-51-like kinase 1,ULK1)通路的关键基因的表达均极显著上升(P<0.01).综上,饥饿诱导绵羊LCs,能够激活AMPK/mTOR/ULK1通路并促进细胞自噬和凋亡的发生.本研究可为进一步探究AMPK对睾丸发育的影响提供理论参考.
基金项目
国家自然科学基金(31872359)
江苏省肉羊产业技术体系建设专项(JATS[2020]427)
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